הפשרת עוברי ארנב: הליך התחממות לשחזור עוברי ארנב שמורים בהקפאה לצורך החזרת עוברים

תקציר

מקור: Garcia-Dominguez, X. et al., Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Phase in Rabbit Model. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מדגים את הליך הפשרת עוברי ארנב מזוגגים ואת צעדי מדידת הזהירות להתאוששות אופטימלית של העוברים.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. התחממות עוברים

1. הפשירו את העוברים בצעד אחד.
   1. מניחים את המיניקש אופקית 10 ס"מ מאדי חנקן נוזלי למשך 20-30 שניות.
   2. כאשר תהליך ההתגבשות מתחיל בתוך המיניקש, טבלו את המיניקש באמבט מים בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס למשך 10-15 שניות.
   3. הסר את תקע המיניקש וחתך את תקע הכותנה.
   4. בעזרת מיקרו-דיספנסר מצומד, הוציאו את כל תכולת המיניקש לצלחת המכילה תמיסת סוכרוז ב-0.33 מ' ב-25°C ב-BM למשך 5 דקות.
      הערה: שלב זה חייב להיעשות במהירות על מנת להפחית את חשיפת העובר לתמיסת הוויטריפיקציה.
   5. העבירו את העוברים לצלחת חדשה המכילה תמיסת BM למשך 5 דקות נוספות.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
חנקן נוזלי	נוזל אוויר	P1505XXX
צלחות פטרי, 35 מ"מ	סיגמא אולדריץ'	CLS430165-500EA
הלבשת פלסטיק (Nobecutan)	IBOR medica	7140028
קש פלסטיק 0.25 מ"ל	IMV - טכנולוגיות	6431
מספריים	רובוז	RS-5880	כל מספריים קטנים וישרים מפלדה ברמה כירורגית רגילה יעבדו.
כפפות סטריליות	Alvet Escartí	087GL010075
שמלה סטרילית	Alvet Escartí	12261501
מסכה סטרילית	Alvet Escartí	058B15924B
תקע קש	IMV - טכנולוגיות	6431
סוכרוז	סיגמא אולדריץ'	S7903
אמבט מים	RAYPA	BAE-4
מלח חוצץ פוספט של Dulbecco (DPBS)	סיגמא אולדריץ'	D5773	ללא סידן כלורי.