מאמר שיטה

החזרת עוברים לארנבת: הליך להעברה מונחית לפרוסקופיה של עוברים לאובידוקט של מודל הארנבת המושתלת-ביוץ

8 ביולי 2025

במאמר זה

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Garcia-Dominguez, X. et al., Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Phase in Rabbit Model. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מתאר את הטכניקה של העברת עוברים לתוך האובידוקט של ארנבת נקבה מושתלת באמצעות לפרוסקופיה. הוא מאפשר עיצוב מחדש של עובר בארנבים במהלך נדידתו דרך האובידוקט, ובסופו של דבר מסייע בהשתלה מוצלחת. טכניקה זו יכולה לשמש גם עבור עוברים מאוחסנים עם יעילות טובה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. החזרת עוברים

  1. הכנת נשים מקבלות
    1. יש להשתמש רק בנקבות בוגרות מינית (> גיל 4.5 חודשים).
    2. שבוע לפני החוצן, התאימו את הנקבות למשטר אור של 16 שעות / 8 שעות חושך כדי ליזום צמיחת זקיקים וקליטה נשית משופרת.
    3. בחר את הנקבות הנמענות, התבוננות במערבולות ובצבע הפות. אם הפות טורגי ואדמדם, הנקבה פתוחה.
    4. לגרום pseudopregnancy (ביוץ) על ידי הזרקה תוך שרירית אחת של 1 מיקרוגרם של buserelin אצטט (אנלוגי סינתטי של הורמון משחרר גונדוטרופין) ללא קשר למשקל הגוף.
      הערה: בדרך כלל, 0.8 מיקרוגרם הוא מינון מתאים להשראת ביוץ בארנבים בגודל בינוני (4-5 ק"ג), כך שמיקרוגרם אחד מבטיח בדרך כלל את הביוץ.
    5. זירוז ביוץ כמה ימים לפני כן כמו גיל העוברים שיש להחזיר (למשל, 70-72 שעות לפני ET מורולה טרי).
  2. הרדמה ושיכוך כאבים
    1. לשקול את הארנב ולטעון את הרדמה הבאה משככי כאבים.
      1. במזרק 1 מ"ל עם מחט 30G: לטעון xylazine (5mg / kg) ו buprenorphine hydrochloride (0.03 מ"ג / ק"ג). במזרק נוסף של 1 מ"ל עם מחט פריגולגולית 23G, טוענים קטמין הידרוכלוריד (35 מ"ג/ק"ג).
    2. החזק את הארנב והזריק את תערובת xylazine-buprenorphine תוך שרירית.
    3. הכנס את המחט pericranial עם קטמין בווריד האוזן השולי, לאט מציג את כל תוכן מזרק תוך ורידי.
    4. תקן את המחט והשאר אותה מוחדרת לאורך השלבים הנותרים כדי לנהל הרדמה נוספת במידת הצורך.
    5. השאירו את הארנב בכלוב (נקי וללא בעלי חיים אחרים) על במה חמה.
    6. לאחר אובדן הכרה, להחיל משחת עיניים כדי למנוע יובש של העין ולבדוק את היעדר freflex.
      הערה: פרוטוקול זה מספק מישור הרדמה כירורגית למשך 30 דקות לפחות. אם נדרש זמן ארוך יותר, יש להזריק מינונים נוספים עם מחצית מכמות הקטמין הידרוכלוריד המתוארת ב-1.2.1 לאחר 30 דקות.
    7. עקוב אחר עומק ההרדמה על ידי בדיקת רפלקס הדוושה ותנועת הנשימה. שינויים בדפוס הנשימה לקצב לא סדיר ומהיר יותר מצביעים על אובדן מישור ההרדמה התקין.
    8. עקוב אחר צבע הריריות (עיניים, שפתיים וכו '), קצב הנשימה (30-60 נשימות לדקה), קצב הלב (120-325 פעימות לדקה) וטמפרטורת פי הטבעת (38-39.6 מעלות צלזיוס).
    9. שמונה שעות לפני ההעברה, הימנעו ממזון מבעלי חיים כדי להימנע מגודל מעיים גדול יותר ומפעילות עד לסיום תהליך החוצן. השאירו גישה חופשית למים.
  3. הכנת עוברים
    1. חממו את אמצעי המניפולציה של העובר ל-25°C: Base Medium (BM), המורכב ממלח חוצץ פוספט (DPBS) של Dulbecco בתוספת 0.2% (w/v) אלבומין בסרום בקר.
    2. עבודה תחת סטריאומיקרוסקופ, לשטוף עוברים טריים או מופשרים (שלב 2) עם BM.
    3. באמצעות כפפות סטריליות, חברו צנתר אפידורלי 17G בתצורה מתאימה למזרק 1 מ"ל.
    4. יש לשאוף 1 ס"מ של BM לתוך הצנתר, ולאחר מכן בועת אוויר קטנה.
    5. שאפו 5-7 עוברים בנפח של 10 מיקרוליטר BM, ולאחר מכן בועת אוויר קטנה נוספת.
    6. לסיים את העמסת הצנתר על ידי שאיפת 1 ס"מ של BM.
  4. החזרת עוברים
    1. שקול את השימוש בכפפות סטריליות, חלוק ומסכה כדי להבטיח סביבה אספטית.
    2. לעקר כלי ניתוח, לנקות את המשטחים שבהם יבוצע הניתוח, ולנגב אותם עם 70% אתנול.
    3. בצע הרדמה כפי שפורט קודם לכן (שלב 1.2), בדיקת אובדן רפלקסים.
    4. לגלח את הפרווה מהבטן הגחונית עם סכין גילוח חשמלי.
    5. הכינו את הבטן הגחונית בצורה אספטלית.
      1. נקו את אזור הניתוח והסירו את שאריות השיער. לשטוף את אזור הניתוח עם סבון gluconate chlorhexidine. לחטא את האזור עם פתרון chlorhexidine אתנול 96 º (3 פעמים).
    6. הניחו את בעל החיים על שולחן ניתוחים חם, בתנוחת טרנדנבורג, (הראש למטה ב-45°) כדי לוודא שהקיבה והמעיים ממוקמים באופן גולגולתי. שקול את פינוי שלפוחית השתן אם הוא turgid. אם קרביים כלשהם ניזוקים בתהליך, בעל החיים עלול למות. לכן חשוב למקם אותם כראוי (איור 1).
    7. כסו את האזור באמצעות מגבת סטרילית, עם חור (fenestration) החושף את האזור המגולח, כדי להפריד את אתר הניתוח מכל אזורים מזהמים פוטנציאליים.
    8. להכניס טרוקאר אנדוסקופי אחד 5 ס"מ לתוך חלל הבטן, 2 ס"מ קאודלי לתהליך xiphoid, ו inuffate דרכו את חלל הצפק עם insufflator מכני מווסת לחץ.
      הערה: הלחץ התוך-בטני צריך להיות 8-12 מ"מ כספית עם CO2 (איור 1A).
    9. הכניסו את מצלמת האנדוסקופ דרך הטרוקאר האנדוסקופי (איור 1B).
      הערה: זהה את מערכת הרבייה, קביעת המצב והמיקום של infundibulum ו ampulla לפני ET כדי להקל על הצעדים הבאים.
    10. הכניסו את המחט האפידורלית 17-G לאזור המפשעה במרחק של 2-3 ס"מ מהאינפונדיבולום (איור 1B).
    11. זהו את הכניסה של האינפונדיבולום (איור 2A, 2B).
    12. הכניסו את הצנתר הטעון (שלב 1.3) דרך המחט האפידורלית לתוך הבטן (איור 1C).
    13. אתרו את האובידוקט והכניסו 1-2 ס"מ של הצנתר האפידורלי דרך האינפונדיבולום באמפולה (איור 2A-2C). אין להתקדם רחוק מאוד לתוך oviduct כדי למנוע נזק ודימום.
    14. שחררו את העוברים לתוך האובידוקט על-ידי לחיצה עדינה על הבוכנה של המזרק המחובר לצנתר (איור 2D-2F). שתי בועות האוויר חייבות לצאת מהקטטר.
    15. הוציאו את הצנתר מיד לאחר שחרור העוברים.
    16. שוטפים את הצנתר, שואפים ומשחררים מדיום מניפולטיבי כדי לבדוק את היעדר העוברים ולאשר את החזרתם המוצלחת.
    17. חזור על שלבים 1.4.11 עד 1.4.16 בצד השני של הרחם, אם תרצה.
    18. הסר את מחט האפידורל ואת מצלמת האנדוסקופ.
    19. שחררוCO2 דרך הטרוקאר האנדוסקופי. אם עודף גז נשאר בבטן של החיה, זה יהיה כאב ואי נוחות.
    20. הסר את הטרוקאר האנדוסקופי מחלל הבטן. הסירו את המגבת הכירורגית.
    21. יש להפסיק את ההרדמה.
    22. נקה את החתך שנעשה על ידי trocar עם פתרון chlorhexidine. סגור את החתך שנעשה על ידי הטרוקאר עם אלומיניום מיקרוני ורוטב פלסטיק.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
איור 1: החזרת עוברים לפרוסקופית בסיוע לפרוסקופיה (מבט חיצוני).א) החדרת הטרוקאר האנדוסקופי (יציאה אחת). ב) החדרת המצלמה האנדוסקופית ומחט האפידורל (חץ שחור). ג) החדרת צנתר החזרת עוברים (חץ לבן) דרך המחט האפידורלית.

figure-results-2

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אלבומין בסרום בקר (BSA) VWR332
בופרנורפין הידרוכלורידAlvet Escartí 626יש להזמין על ידי וטרינר מורשה.
Buserelin אצטט סיגמא אולדריץ' B3303
CO2 נוזל אוויר 99921CO2 N48.
מלח חוצץ פוספט של Dulbecco (DPBS) סיגמא אולדריץ'D5773 ללא סידן כלורי
סכין גילוח חשמלי אוסטר גולדן A5 078005-140-002
מצלמת אנדוסקופ Optomic ספרד דרום אמריקהOP-714
אנדוסקופ טרוקאר עם שסתום עלון סיליקון קרל סטורץ אנדוסקופיה איבריקה דרום אמריקה30114GK דגם טרוקאר קל.
סבון Clorhexidine digluconate Alvet Escartí0265DCCJ500B
מחט אפיגולגולית 23GAlvet Escartí514056353 להשתמש גם במחטים קטנות יותר.
צנתר אפידורלי חברת Vygon187.1
מחט אפידורלית חברת Vygon187.1
משחת עיניים Alvet Escartí 5273
ציוד לפרוסקופיה קרל סטורץ אנדוסקופיה איבריקה דרום אמריקה 26003 AA Hopkins® Laparoscope, לפרוסקופ 0º מ"מ לצפייה ישרה, אורך 30 ס"מ, ערוץ עבודה 5 מ"מ.
מקור אור Optomic ספרד דרום אמריקהפיברולוקס 250
מכני CO2 insufflator קרל סטורץ אנדוסקופיה איבריקה דרום אמריקהאנדופלטור®
צינור סיליקון לאינסופלטוr Karl Storz Endoscopia Ibérica דרום אמריקה20400040
סטריאומיקרוסקופ לייקה MZ16F ישנן אפשרויות זולות יותר כגון Leica MZ8 או Nikon SMZ-10 או SMZ-2B, בין היתר.
ארנבונים Universitat Politècnica de València קו א'ניתן להשתמש בקווים אימהיים אחרים, כגון Line V או Line HP.
ניתן

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים