Recombinant Adeno Associated Virus Based Gene Delivery: טכניקה להעברת טרנסגנים וביטוי ספציפי ללב במודל מכרסם

תקציר

מקור: Ding, J. et al. הכנת rAAV9 לביטוי יתר או להפלה של גנים בלבבות עכברים. J. Vis. Exp. (2016)

בסרטון זה, אנו מדגימים העברת גנים רקומביננטיים מבוססי וירוס הקשורים לאדנו בגור העכבר. שיטה זו מסייעת בחקר ביטוי גנים בתאי היעד.

פרוטוקול

1. יש לטפל בעכברים ילודים עם rAAV9 ב-P0.5-P2.5 בהזרקה תת עורית.

1. מלא מראש מזרק אינסולין 29G1/2, 0.33 x 12.7 מ"מ בתמיסת וירוס 9 הקשור באדנו רקומביננטי (rAAV9). היזהר להסיר בועות אוויר.
2. החזיקו את הגור המורדם בהקפאה ביד אחת עם האגודל והאצבע. לפני ההזרקה, החליקו את העור האחורי של הגור עם מקלון רווי ב-70% אלכוהול איזופרופיל כדי לשמור על המצב הסטרילי. הכנס את מחט המזרק לתוך subcutis הקדמי-גבי של החיה בזווית של 5 עד 10°. להזריק 50-70 μl של פתרון rAAV9 באמצעות מזרק אינסולין.
   הערה: rAAV9 יכול גם להיות מועבר לעכבר באמצעות הזרקה intraperitoneal או תוך ורידי. ניתן להשיג ביטוי יעיל של הגנים המועברים בלב. עם זאת, הזרקה תוך צפקית עלולה לעיתים לגרום לביטוי דולף בכבד. לאחר ההזרקה, מצב הגורים היה במעקב מדי יום.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
וקטור rAAV9	פן וקטור ליבה	עמ' 1967