$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. כימות פלואורומטרי של שומנים ניטרליים באמצעות אדום הנילוס
הערה: רק 10 μl של תרחיף אצות ב 5 גרם / ליטר נדרש לקריאת פלואורסצנטיות. בדרך כלל, בידוד של ביומסה אצות יבשות מ 1.5 מ"ל של מרק תרבית הוא יותר ממספיק. כמו כן, עוצמת האור של המנורה בספקטרופוטומטר יכולה לרדת עם הזמן. מומלץ לכלול תקנים בכל ניסוי כדי להבטיח שווריאציות במכשיר לא יוסיפו טעויות מיותרות למדידות.
- הכינו תמיסה בצבע אדום הנילוס בריכוז של 10 מק"ג/מ"ל מומס באתנול בדרגת מגיב אלכוהול. אחסנו תמיסה זו בחושך בטמפרטורה של 4°C.
- הכינו תמיסת אתנול 30% (v/v) במים נטולי יונים, ואחסנו בטמפרטורה של 4°C.
- הכינו את כל דגימות האצות באותו ריכוז ביומסה (מומלץ 5 גרם/ליטר) ובאותו אופן כמו התקנים המשמשים במדידה. עשו זאת על ידי השעיית דגימות מיובשות מראש בכמות המתאימה של חיץ פוספט (0.6 גרם/ליטר אשלגן פוספט דו-בסיסי, 1.4 גרם/ליטר אשלגן פוספט חד-בסיסי), או התאמת הריכוז של תרבית אצות גדלה ל-5 גרם/ליטר עם חיץ פוספט לאחר מדידת העכירות.
הערה: מדידות המבוצעות על תרביות אצות חיות יהיו לעתים קרובות שגיאה גדולה יותר הקשורה אליהן בהתאם לדיוק של עקומת כיול העכירות. השעיית דגימות מיובשות עשויה לדרוש שימוש בהומוגנייזר כדי לפזר את הביומסה במלואה.
- עבור כל דגימה, מערבבים 80 μl של תמיסת אתנול 30%, 10 μl של תמיסת הנילוס אדום, ו 10 μl של תרחיף אצות בבאר אחת של צלחת 96 באר. על מנת להסביר כראוי את השונות של מדידת הפלואורסצנטיות, בצע 5 העתקים של כל דגימה.
- הפעל עקומת כיול דו-נקודתית עם תקנים כדי להתחשב בשינויים היומיומיים במכשיר ובהכנה. הכן את התקנים למדידת פלואורסצנטיות באותו הליך כמו הדגימות.
הערה: בדרך כלל, שתי נקודות מספיקות לכיול מחדש של המכשיר, ניתן להריץ שלוש נקודות כדי לאמת ליניאריות.
- בצע את מדידות הפלואורסצנטיות בספקטרופוטומטר קורא לוחות מרובה בארות. התנאים הבאים נמצאו כמניבים את התוצאות העקביות ביותר:
- טלטול ב-1,200 סל"ד, מסלול 3 מ"מ, למשך 30 שניות.
- יש לדגור בטמפרטורה של 40°C למשך 10 דקות.
- טלטול ב-1,200 סל"ד, מסלול 3 מ"מ, למשך 30 שניות.
- שיא פלואורסצנטי, עירור ב 530 ננומטר, פליטה ב 604 ננומטר.
- המירו את מדידות הפלואורסצנטיות לתכולת השמן באמצעות התוצאות מהתקנים הפנימיים.