צביעה אדומה של הנילוס: טכניקה לזיהוי וכימות שומנים ניטרליים תוך-תאיים באצות

תקציר

מקור: Storms, Z. J. et al. פרוטוקול פשוט ומהיר למדידת שומנים ניטרליים בתאי אצות באמצעות פלואורסצנטיות. J. Vis. Exp. (2014)

סרטון זה מדגים פרוטוקול לזיהוי וכימות שומנים ניטרליים בתאי אצות על ידי צביעתם בצבע אדום הנילוס.

פרוטוקול

1. כימות פלואורומטרי של שומנים ניטרליים באמצעות אדום הנילוס

הערה: רק 10 μl של תרחיף אצות ב 5 גרם / ליטר נדרש לקריאת פלואורסצנטיות. בדרך כלל, בידוד של ביומסה אצות יבשות מ 1.5 מ"ל של מרק תרבית הוא יותר ממספיק. כמו כן, עוצמת האור של המנורה בספקטרופוטומטר יכולה לרדת עם הזמן. מומלץ לכלול תקנים בכל ניסוי כדי להבטיח שווריאציות במכשיר לא יוסיפו טעויות מיותרות למדידות.

1. הכינו תמיסה בצבע אדום הנילוס בריכוז של 10 מק"ג/מ"ל מומס באתנול בדרגת מגיב אלכוהול. אחסנו תמיסה זו בחושך בטמפרטורה של 4°C.
2. הכינו תמיסת אתנול 30% (v/v) במים נטולי יונים, ואחסנו בטמפרטורה של 4°C.
3. הכינו את כל דגימות האצות ....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
25 מ"ל פיפטות חד פעמיות	פישר	13-676-10K
נורת פיפטה	פישר	13-681-51
1.5 מ"ל צינורות מיקרוצנטריפוגות	פישר	05-408-129
40 מ"ל צינורות צנטריפוגה (FEP)	פישר	05-562-16א	יכול גם להשתמש בצינורות זכוכית
פיפטות זכוכית פסטר	פישר	13-678-20ג
אדום הנילוס	סיגמא	N3013-100MG
אתנול (כיתה מגיב אלכוהול)	פישר	AC65109-0020
מיקרוסקופ Leica DMRXA2 (או שווה ערך)	לייקה	DMRXA2
קורא צלחות רב באר פלואורסצנטי	מערכות Thermo Lab	פלואורוסקאן אסנס
תוכנת קורא פלואורסצנטיות	מערכות Thermo Lab	תוכנת עלייה 2.6
צלחת באר COSTAR 96 עם תחתית עגולה	פישר	06-443-2