$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. שיטת הקפסולה להשבתה בהכלה ביולוגית עם 2% גלוטראלדהיד, ואחריה צביעה שלילית במעבדת BSL-2
- הליך השבתת וירוסים.
- בתוך ה-BSC של ההכלה הביולוגית, יש לערבב היטב את תרחיף הנגיף עם אותו נפח של 4% גלוטראלדהיד כדי להגיע לריכוז סופי של 2% גלוטראלדהיד.
זהירות: גלוטראלדהיד הוא כימיקל מסוכן ודורש הגנה מתאימה. גלוטראלדהיד יכול לשמש לפרקי זמן קצרים ב- BSC רגיל, אך מגיב פתוח מורחב דורש עבודה במכסה מנוע BSC או אדים כימיים.
- השבת וירוסים עם קיבוע למשך 24 שעות לפחות לפני האריזה, הטיהור והעבר אותו למתקן BSL-2 EM.
- במתקן BSL-2 EM, שאפו את הנגיף ואת תערובת הקיבוע לתוך הקפסולה, המכילה שתי רשתות TEM, המחוברות לפיפטה.
- מניחים את הפיפטה אופקית למשך 10 דקות כשהרשתות בכיוון אופקי.
הערה: זאת כדי לקדם הפצה אחידה של חלקיקי וירוסים על רשתות TEM.
- להרים את פיפטה ולחץ על הבוכנה כדי לגרש את הנגיף למיכל פסולת. יש לשאוף 40 μL של מים dI לתוך הכמוסות ולגרש אותם לתוך מיכל הפסולת למשך 3 מחזורי שטיפה.
- יש לשאוף 40 μL של 1% אורניל אצטט (UA) או 1% אשלגן פוספוטונגסטי חומצה (PTA) לתוך הכמוסות במשך 30 s.
הערה: זמן הצביעה השתנה בין 10 שניות לדקה אחת בהתבסס על דגימת וירוס.
זהירות: UA הוא פולט אלפא, ורעל מצטבר. טפל בו עם הגנה מתאימה.
- מוציאים את הקפסולה מהפיפטה ומייבשים את הרשתות על ידי נגיעה בשולי הרשתות בפיסת נייר פילטר. יבש את הרשתות באוויר ואחסן אותן להדמיית TEM עוקבת.