מאמר שיטה

צביעה כחולה טולוידין של קטעי עצב היקפיים: טכניקה להכתמת סיבי עצב מיאלינים להדמיית מבנה עצב היקפי

8 ביולי 2025

במאמר זה

תקציר

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Ghnenis, A. B. et al., Toluidine Blue Staining of Resin-embedded sections for Evaluation of Peripheral Nerve Morphology.J. Vis. Exp.(2018)

סרטון זה מדגים את טכניקת הצביעה של קטעי עצבים היקפיים של חולדות מוטמעות שרף, המטופלות באוסמיום טטרוקסיד באמצעות כחול טולוידין. קטעי העצבים המוכתמים עוזרים לדמיין את המבנים העדינים של העצבים ההיקפיים.

פרוטוקול

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. צביעה כחולה טולוידין

  1. להכין 1% פתרון של toluidine כחול על ידי המסת 2 גרם של borate נתרן ב 100 מ"ל של מים deionized, ולאחר מכן להוסיף 1 גרם של toluidine כחול וערבב עד מומס. סננו את התמיסה באמצעות נייר פילטר (גודל נקבוביות: 11 מיקרומטר) ושמרו את התמיסה בבקבוק אטום בטמפרטורת החדר עד שבועיים.
  2. באמצעות פיפטה פלסטיק או מיקרו pipettor, להוסיף טיפה של תמיסה כחולה toluidine על החלק העליון של קטעי העצבים ולהשאיר במשך 20-30 שניות.
  3. יש לשטוף את כל עודפי התמיסה הכחולה של טולוידין על ידי טבילה עדינה של המגלשות בצנצנת מים נטולת יונים, ולחזור על הפעולה 3-4 פעמים עד לקבלת חלקים ברורים. יבשו את המגלשות לפחות 15 דקות בטמפרטורה של 60°C או למשך הלילה בטמפרטורת החדר ולאחר מכן כסו את החלקים בכיסוי באמצעות אמצעי הרכבה רגיל. בדוק מיד את המגלשות המותקנות או אחסן בטמפרטורת החדר.
  4. יש לבחון תחת מיקרוסקופ אור. עדשת טבילת שמן 100X מומלצת לתמונות מפורטות המשמשות לחישוב יחסי g.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
טולוידין כחול Oסיגמא-אולדריץ'T3260
נתרן טטרבוראט דקהידראטאקרוס אורגניקס205950010
זכוכית כיסוי למיקרוסקופפישר סיינטיפיק12545102
מגלשות מיקרו VWR, Superfrost PlusVWR48311-703
תנור 100 וואטמיליפור 6350115
נייר סינון Whatmanסיגמא-אולדריץ'WHA10010155
מיקרוסקופ פלואורסצנטי אולימפוסמצלמת CCD כפולה בצבע ובשחור-לבן, DP80
3 מ"ל פיפטה פלסטיקסיגמא-אולדריץ'Z331740

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

G G Ratio

מאמרים קשורים