מאמר שיטה

צביעת TTC של פרוסות רקמת מוח חולדה: הליך צביעה להבדיל בין רקמה בת קיימא ונמקית בפרוסות רקמה לאחר פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה

8 ביולי 2025

במאמר זה

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Liepinsh, E., et al. מכרסם הכנת רקמות לב ומוח לצילום מאקרו דיגיטלי לאחר איסכמיה-רפרפוזיה. J. Vis. Exp. (2022)

סרטון זה מתאר את הליך צביעת 2,3,5-triphenyl-2H-tetrazolium כלוריד כדי לדמיין פרוסות רקמת מוח של חולדה ולהבדיל רקמות בנות קיימא ופגומות לאחר חסימה ורפרפוזיה של עורק המוח האמצעי.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. צביעת מוח וחיתוך

  1. לאחר ניסוי חסימת עורק המוח האמצעי, הוציאו את המוח, כולל גזע המוח, מהגולגולת, ושטפו אותו ב-PBS קר כקרח.
  2. בחרו את הגודל הנכון של מטריצת הנירוסטה במוח (ראו טבלת חומרים) כתלות במשקל החיות (איור 1B). מקם את המוח עם הצד הגחוני שלו למעלה במטריצת המוח.
    הערה: כאשר יושבים במטריצה, משטח הגחון של המוח חייב להיות מקביל למשטח העליון של התבנית.
  3. באמצעות להבים, להגביל את החלקים הקדמיים והקאודליים (2 להבים משני הצדדים) של המוח.
    הערה: יש להשתמש בסכיני גילוח תואמי מטריצה פורסים. באופן כללי, ניתן להשתמש בסכין גילוח תואם בעל קצה יחיד (עובי של עד 0.01 אינץ' (0.254 מ"מ)) לחיתוך מוח של חולדה.
  4. הכניסו את הלהבים באופן חלקי (לא לגמרי חותכים את המוח) לתוך התעלות שבין הלהב הראשון לאחרון. כאשר כל הלהבים מוכנסים ומסודרים במקביל, לחץ על כל הלהבים למטה עם כף היד בו זמנית כדי לחתוך את המוח לפרוסות קורונליות 2 מ"מ.
  5. אחזו את הלהבים בחוזקה לאורך הצדדים בשתי אצבעות והוציאו אותם יחד עם המוח החתוך מהמטריצה.
  6. סדרו את פרוסות המוח בזו אחר זו במגש (70 מ"ל, 72 x 72 מ"מ). בעת סידור הפרוסות, ודא שהמשטח הקדמי של כל פרוסה פונה תמיד כלפי מעלה.
  7. שפכו תמיסת 1% TTC חמה (+37 °C) ב-PBS על פרוסות המוח ודגרו עליהן במשך 8 דקות ב-37°C בחושך.
    הערה: פרוסות המוח חייבות להיות שקועות לחלוטין בתמיסת TTC במהלך הדגירה.
  8. לאחר הדגירה בתמיסת TTC 1%, העבירו את פרוסות המוח למגש הפלסטיק הכחול כדי לצלם תמונות. סדרו את פרוסות המוח בסדר רציף מהחלק המצחי לחלק הקאודלי והשתמשו באזמל כדי להפריד את ההמיספרות במישור הקשת.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
איור 1: מטריצות עבור לב החולדה וחיתוך המוח. (A) לב חולדה, (B) מוח חולדה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
2,3,5-טריפנילטטרזוליום כלוריד (TTC)סיגמא-אולדריץ'298-96-4
מטריצת חותך מוח של חולדה בוגרתזיויק אינסטרומנטסBSRAS001-1
סכיני גילוח בעלי קצה יחידזיויק אינסטרומנטסBLADE012.1
Sony Alpha a6000 מצלמה דיגיטלית ללא מראהסוניILCE6000ניתן לשחזור על ידי כל מצלמה דיגיטלית עדכנית
להב כירורגיHeinz Herenz , המבורג, גרמניהBS2982
מגש שקילה, 70 מ"לSarsted71,99,23,212
תרמו-שייקרביוסאןPST-60HL-4
מלקחיים רקמת שןאגנתוס11021-12
נתרן כלוריפישר ביוריאגנטיםBP358-10
כיסוי זכוכית מלקחיים, זוויתיתכלים מדעיים משובחים11073-10

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים