מכתים Papanicolaou: טכניקה כדי לדמיין את התכונות הציטולוגיות של תאי צינורית

תקציר

מקור: Chen, H. et al. ציטולוגיה של חצוצרה ככלי מבטיח לגילוי מוקדם של סרטן השחלות. J. Vis. Exp. (2017).

בסרטון זה, אנו מדגימים פרוטוקול שונה של צביעת פאפאניקולאו כדי לחקור ציטולוגיה של חצוצרות. טכניקה זו יכולה לשמש כדי לדמיין את התכונות הציטולוגיות של תאי אפיתל חצוצרה ממאירים ולא ממאירים.

פרוטוקול

1. פרוטוקול צביעת פאפאניקולאו שונה

1. הכתימו את השקופיות שנמרחו ברקמה על ידי הפעלת הליך אוטומטי של כתמים שאינם גניקולוגיים, כפי שמודגם בטבלה 1.
   הערה: שיטת הצביעה מייצגת שינוי של טכניקת הצביעה Papanicolaou בה אנו משתמשים באופן שגרתי עבור דגימות שאינן גניקולוגיות. אנו משתמשים במעבד רקמות אוטומטי כדי להכתים שקופיות מסוימות. במחקר זה בחרנו בהליך צביעה Non-Gyn על פני הליך צביעת ג'ין. ה-Eosin המשמש הוא EA-65, במקום EA-50 המשמש לדגימות גינקולוגיות (Pag smear specimen). בנוסף, OG-6 בהליך צביעת תאי קשקש, המיועד בעיקר לצביעת תאי קשקש, אינו נכלל בהליך הצביעה מכיוון שלא צפויים להיראות תאי קשקש במחקר זה. EA65 (Eosin Azure) היא תמיסת כתמים נגדית המורכבת מ-3 צבעים: Eosin Y, FCF ירוק מהיר ו-Bismarck brown Y. ההליך מומחש בטבלה 1.
2. בצע הליך ידני מהיר של כתמי פאפ באופן הבא:
   1. טובלים את הרקמה מרוחה ב-95% אתנול, 10 פעמים, כאשר כל טבילה אורכת כ-1 שניות.
   2. טבלו את המגלשה ב-H₂O, 10 פעמים, כאשר כל טבילה אורכת כ-1 שניות.
   3. לצאת את השקופית hematoxylin במשך 10 - 60 שניות.
   4. טבלו את המגלשה ב-H₂O, 10 פעמים, כאשר כל טבילה אורכת כ-1 שניות.
   5. טובלים את המגלשה באתנול 95%, 10 פעמים, כאשר כל טבילה אורכת כשנייה אחת.
   6. צא מהשקופית ב- EA65 למשך 1 - 3 דקות.
   7. טבלו את המגלשה ב-H₂O, 10 פעמים, כאשר כל טבילה אורכת כ-1 שניות.
   8. טובלים את המגלשה באתנול 95%, 10 פעמים, כאשר כל טבילה אורכת כ-1 שניות.
   9. טבלו את השקופית בקסילן עד שהשקופית תתבהר.
      הערה: זהו הליך צביעת Papanicolaou שונה. שיטה זו משמשת כשיטת כתמים מהירה יותר במקרים עם זמן או מקום מוגבלים כמו שאיבת מחט עדינה באתר ודגימות STAT. הליך זה מספק צביעה באיכות דומה להליך האוטומטי של צביעה שאינה ג'ין. ההליך מומחש בטבלה 2.

טבלה 1: שלבי כתמים שאינם גניקולוגיים.

95% אתנול	5 דקות
H2O	10 שניות
המטוקסילין	15 שניות - 3 דקות
H2O מזוקק	5 דקות
95% אתנול	30 שניות
EA65	2 - 5 דקות
95% אתנול	30 שניות
95% אתנול	30 שניות
100% אתנול	30 שניות
100% אתנול	30 שניות
קסילן	30 שניות
קסילן	5 דקות

טבלה 2: שלבים ידניים מהירים לצביעת פאפ.

95% אתנול	10 מטבלים
H2O	10 מטבלים
המטוקסילין	10 שניות עד 1 דקות
H2O מזוקק	10 מטבלים
95% אתנול	10 מטבלים
EA65	1 - 3 דקות
95% אתנול	10 מטבלים
100% אתנול	10 מטבלים
קסילן	טובלים עד לניקוי

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
כתם פאפאניקולאו, EA 65	סיגמה אולדריץ'	HT40432
95% אתנול	סיגמה אולדריץ'	652261
100% אתנול	סיגמה אולדריץ'	493538
קסילן	סיגמה אולדריץ'	214736
המטוקסילין	סיגמה אולדריץ'	H9627