מסון גולדנר צביעת טריכרום: טכניקה להמחשת קולגן באזורי לב לזיהוי פיברוזיס קרדיווסקולרי

תקציר

מקור: Valentin, J., et al. כימות היסטולוגי של דלקת שריר הלב כרונית בחולדות. J. Vis. Exp.(2016).

סרטון זה מדגים את הצביעה הדיפרנציאלית של סיבי קולגן, גרעינים וציטופלסמה ברקמת הלב כדי להמחיש צמיחה פיברוטית הקשורה לפתולוגיות לב

.

פרוטוקול

1. מסון-גולדנר צביעת טריכרום

1. צור קטעי רקמה מגושי לב משובצים פרפין עם מיקרוטום ידני (עובי: 5 מיקרומטר).
2. צבעו שקופית אחת מכל חלק לב עבור כל חולדה (3 - 4 מקטעים רוחביים בכל שקופית) עם צביעת טריכרום של מאסון-גולדנר.
   1. ממיסים את המגלשות ב-60°C בתנור. מתחת למכסה אדים, מפרקים אותם בקסילול פעמיים למשך 10 דקות כל אחד. התייבשו אותם ב-100% אתנול, 95% אתנול, 70% אתנול ומים מזוקקים למשך 3 דקות כל אחד.
   2. תקן אותם בתמיסת Bouin בן לילה. לאחר מכן, שטפו אותם במי ברז זורמים במשך 10 - 15 דקות. שטפו אותם במים מזוקקים. דוגרים אותם בהמטוקסילין של מאייר למשך 3 דקות.
   3. מוציאים את המגלשות ומשאירים אותן במים מזוקקים למשך 5 דקות. לאחר מכן, לדגור אותם חומצה Fuchsin-Ponceau במשך 5 דקות. שטפו אותם בחומצה אצטית 1% למשך דקה אחת.
   4. לאחר מכן, לדגור אותם בחומצה phosphomolybdic כתום G במשך 1 דקות. לשטוף אותם 1% חומצה אצטית במשך 1 דקות, לדגור אותם בצבע ירוק בהיר במשך 10 דקות, ולשטוף אותם 1% חומצה אצטית במשך 1 דקות.
   5. יש לייבש אותם ב-70% אתנול (30 שניות), 95% אתנול (30 שניות) ו-100% אתנול (5 דקות). שים טיפה אחת של מדיום הרכבה שרף על חלקי הרקמות, לכסות אותם עם כיסויים, ולתת להם להתייבש.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מאיר המטוקסילין	MHS32-1L	סיגמא אולדריץ'
חומצה פוקסין CI 42685	F8129-50G	סיגמא אולדריץ'
Ponceau Xylidin CI 16150	P2395-25G	סיגמא אולדריץ'
Orange G CI 16230	O3756-100G	סיגמא אולדריץ'
CI בצבע ירוק בהיר 42095	L5382-25G	סיגמא אולדריץ'
קסילול	10315083	האניוול
אתנול מוחלט	10303990	האניוול
מיקרוסקופ סטרילוגי	SM2800	ניקון
פורמלדהיד	99340	ריאטוקלאב
שיבוץ קלטת	K113.1	קרל רות'
ברסופט תוכנה למדידת תמונות		Bersoft.com	תוכנה מורשית