כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. כימות פיברוזיס רקמות
- הניחו את רקמת הלב המקובעת בפרפורמלדהיד על מכשיר לחיתוך רקמות וחתכו מקטעים בעובי 2 מ"מ. מניחים את חלקי הרקמה בקלטת הטבעה. יש לייבש את הרקמה באמצעות סדרה של אמבטיות אלכוהול מדורגות (50%, 75%, 95% ו-100% למשך שעה כל אחת).
- להחדיר את הרקמה עם קסילן במשך 1 שעה ולבסוף שעווה במשך 1 שעה. מניחים את הרקמה המוחדרת לתוך קלטת הטבעה ולהטמיע עם שעוות פרפין. אחסנו את הרקמות המשובצות בגושי פרפין בטמפרטורת החדר עד למיקרוטומינג.
- פורסים את הרקמה המשובצת למקטעים בעובי 4 מיקרומטר. מניחים את החלקים באמבט מים של 45 מעלות צלזיוס. טובלים מגלשת זכוכית באמבט המים בזווית ומתקרבים בהדרגה לקצוות חתך הפרפין כדי לאפשר חיבור חלקי למגלשה.
- הזיזו את המגלשה פנימה והחוצה מהאמבטיה כדי להסיר כיסי אוויר פוטנציאליים מתחת לאזור הרקמה וכדי להקל על חיבור טוב יותר. יבשו את המגלשות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך שעה ואחסנו אותן בטמפרטורת החדר לצביעה היסטולוגית.
- הכניסו את המגלשה לטנק. יש לפרק את המגלשה עם קסילן למשך 30 דקות ולהרטיב אותה באלכוהול מדולל ברצף (95%, 75% ו-50% למשך 3 דקות כל אחד) ולבסוף במים מזוקקים. השתמש בתמיסה אדומה picrosirius מתאים כדי לכסות לחלוטין את קטעי הרקמה במשך 1 שעה. שטפו את המגלשות בתמיסת חומצה אצטית 0.5% למשך שני שינויים, ולאחר מכן בצעו שתי שטיפות באלכוהול מוחלט.
- יבשו את המגלשה באוויר והרכיבו את המגלשה בשרף סינתטי בעזרת כיסוי. צלם את השקופית בשדה אור נראה.
הערה: האזור האדום בתצלום מראה אזור חיובי אדום פיקרוסיריוס תחת מיקרוסקופ בהגדלה של פי 200. חישוב אחוז האזור החיובי האדום picrosirius על פני השטח הכולל, אשר מציין את מידת פיברוזיס.
