צביעה אדומה של קונגו: טכניקה להמחשת משקעי תאית בקטעי גזע צמחיים

תקציר

מקור: Pradhan Mitra, P., Loqué, D. צביעה היסטוכימית של Arabidopsis thaliana אלמנטים דופן התא המשני. J. Vis. Exp. (2014).

בסרטון זה, אנו מדגימים את שיטת הצביעה האדומה של קונגו כדי לדמיין משקעי תאית בקטעי גזע Arabidopsis thaliana .

פרוטוקול

1. צביעה אדומה של קונגו

1. יש להמיס 0.5 גרם קונגו אדום ב-100 מ"ל מים מזוקקים להכנת תמיסה אדומה של קונגו 0.5%.
2. מעבירים את קטעי הגבעול לצינור מיקרוצנטריפוגה בנפח 2.0 מ"ל. הוסף 1 מ"ל של 0.5% קונגו אדום פתרון לצינור. מרפטים בעדינות את התמיסה האדומה של קונגו 0.5% למעלה ולמטה מבלי להפריע לסעיפים.
   הערה: היזהר לא להכניס את המקטעים לקצה פיפטה מכיוון שהדבר עלול לגרום נזק למקטעים.
3. דוגרים בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות וחוזרים על הפיפט. לאחר מכן יש לדגור עוד 3 דקות בטמפרטורת החדר.
4. השתמש פיפטה 1 מ"ל כדי לשאוב 700 μl של 0.5% קונגו אדום פתרון. הוסיפו 700 מיקרוליטר מים מזוקקים כדי לשטוף את התמיסה האדומה של קונגו. חזרו על הכביסה 3-4 פעמים עד שתמיסת הכביסה נקייה.
5. השתמש פיפטה 1 מ"ל עם קצה לחתוך בצורה כזו כי חלקים ניתן pipeted החוצה בקלות ללא נזק. מקטעי פיפטה עדינים לתוך הקצה ועל מגלשת מיקרוסקופ ומכסים אותם בכיסוי. צפו בדגימות בשקופית המיקרוסקופ תחת עירור אור כחול באמצעות מסנן עם פס פס של 560/40.
   הערה: אין לאחסן את המקטעים במים זמן רב לפני הניתוח המיקרוסקופי, מכיוון שהמים ישטפו את הקונגו האדום תוך 10-30 דקות.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
קונגו אדום	סיגמא	C6277	דיסודיום 3,3'-[[1,1'-ביפניל]-4,4'-דילביס(אזו)]bis(4-aminonaphthalene 1-sulphonate) [מספר CAS 573-58-0]
צינורות מיקרוצנטריפוגות (0.6 מ"ל)	Axygen סיינטיפיק	MCT-060-C
מצלמה עם שבב CCD ללא תריס מכני	האמאמאטסו	C4742-95
מצלמה צבעונית במהירות גבוהה	צ'ימאגינג	MicroPublisher 5.0 RTV
תוכנת מצלמה	התקנים מולקולריים	MetaMorph גרסה 7.7.0.0
לדמיין אנליזה	אדובי	פוטושופ CS4
משקפי מיקרו כיסוי, מרובע, מס' 1	VWR	48366-067	22 x 22 מ"מ (7/8 x 7/8 אינץ')-כוסות כיסוי עמידות בפני קורוזיה ועובות ושטוחות באופן אחיד. עובי מס '1 הוא 0.13 עד 0.17 מ"מ.
מגלשות מיקרו חלביות, 1 מ"מ	VWR	48312-003	75 x 25 מ"מ - 1 מ"מ
קוביית מסנן TX2	לייקה	11513851/11513885	מסנן המשמש לניתוח אדום קונגו עם פס פס של 560/40.