צביעה לבנה Calcofluor: שיטה פשוטה להדמיית פלואורסצנטיות הנגרמת על ידי UV של משקעי תאית בדפנות התא של קטעי גזע צמח דיקוט

תקציר

מקור: Pradhan M. et al. צביעה היסטוכימית של רכיבי דופן התא המשני Arabidopsis thaliana . J. Vis. Exp. (2014)

בסרטון זה, אנו מתארים הליך צביעה כדי לדמיין שקיעת תאית בתוך דפנות התא של Arabidopsis thaliana, צמח דיקוט, באמצעות calcofluor לבן, אשר נקשר במיוחד גלוקנים הקשורים β, מציג פלואורסצנטיות תחת אור UV.

פרוטוקול

1. שיבוץ גזע

1. הכינו תמיסת אגרוז 7% במים (7 גרם אגרוז בדרגת אלקטרופורזה במים מזוקקים של 100 מ"ל). יש להמיס את האגרוז על ידי אוטוקלאבינג למשך 20 דקות או על ידי גלי מיקרו למשך 20 דקות בעוצמה הנמוכה ביותר (למשל, עוצמה של 10% של מיקרוגל של 1,250 וואט).
2. מכינים תבנית ביתית להטמעת הגבעולים באמצעות בקבוקוני פלסטיק.
   1. באמצעות סכין גילוח, חתכו את התחתית החרוטית של צינור מיקרוצנטריפוגה בעל מכסה בורג של 2 מ"ל (חלק A). בעזרת מחט מזרק, נקבו חור במכסה הצינור מעט גדול מקוטר הגבעול שיש להטביע. לאחר מכן, לחתוך 0.5 ס"מ מהתחתית של צינור מיקרוצנטריפוגה 0.6 מ"ל (חלק B).
   2. הוסף את החלק החתוך 0.5 ס"מ של צינור מיקרוצנטריפוגה 0.6....

תוצאות

איור 1. תבנית ביתית להטמעת הגבעולים. בצד שמאל; החלק העליון של צינור מיקרוצנטריפוגה עם מכסה בורג של 2 מ"ל (חלק A) והחלק התחתון של צינור מיקרוצנטריפוגה של 0.6 מ"ל (חלק B). בצד ימין; הפרפילם מחזיק את שני החלקים; A ו- B כדי ליצור את התבנית הסופית.

....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
אגרוז	EMD	MERC2125	מספר CAS: 9012-36-6
מבהיר פלואורסצנטי 28/ כתם לבן Calcofluor	סיגמא	F3543	4,4'-ביס[[4-[bis(2-hydroxyethyl)amino]-6-anilino-1,3,5-triazin-2-yl]amino]stilbene-2,2'-חומצה דיסולפונית [מספר CAS 4404-43-7]
ויברטומה	לייקה	מיקרוטום להב רוטט של Leica VT1000S	http://www.leicabiosystems.com/products/sectioning/vibrating-blade-microtomes/details/product/leica-vt1000-s/
תער	חברת סכיני הגילוח American Safety	פריט # 60-0139-0000	להב קצה כפול מפלדת אל-חלד (Personna Super)
פקק בורג צינורות מיקרוצנטריפוגות (2 מ"ל)	VWR	16466-044
צינורות מיקרוצנטריפוגות (0.6 מ"ל)	Axygen סיינטיפיק	MCT-060-C
מיט	בל-ארט	380000000	SCIENCEWARE מגן יד חם מיט
דבק רקמות	טד פלה בע"מ	10033	יש לאחסן בטמפרטורה של 4°C או 20°C למשך 3 חודשים או יותר לאחסון
מיקרוגל	פנסוניק	NN-SD762S	PELCO Pro CA 44 דבק רקמות מיידי
משקפי מיקרו כיסוי, מרובע, מס' 1	VWR	48366-067	22 x 22 מ"מ (7/8 x 7/8 אינץ')-כוסות כיסוי עמידות בפני קורוזיה ועובות ושטוחות באופן אחיד. עובי מס '1 הוא 0.13 עד 0.17 מ"מ.
מגלשות מיקרו חלביות, 1 מ"מ	VWR	48312-003	75 x 25 מ"מ - 1 מ"מ
פארפילם מ	אריזת אלקאן	BRNDPM998