בדיקת עכבה מבוססת מערכים תלת תאים: טכניקת ניתוח בזמן אמת להערכת פוטנציאל פולשני של תאים סרטניים על ידי מדידת עכבה חשמלית

Abstract

מקור: Sharif, G. M. et al., זיהוי ולכידה בזמן אמת של תת-אוכלוסיות תאים פולשניות מתרביות משותפות. J. Vis. Exp. (2022).

סרטון זה מתאר בדיקת פלישה באמצעות מערך תלת-תאי המבוסס על עכבה חשמלית. טכניקה זו מודדת את הפוטנציאל הפולשני של תאים סרטניים בהשפעת גורמים מסיסים המופרשים על ידי תאי סטרומה השוכנים במיקרו-סביבות גידוליות.

Protocol

1. עיצוב תא חדש (איור 1)

1. פתח לוח מנתח תאים דו-תאי חדש. הניחו בצד את התא העליון עם אלקטרודות.
2. באמצעות מכונת כרסום, לגלח 2 מ"מ של בארות תחתונות בצורת U של צלחת אנלייזר התא.
3. חבר קרום פוליאתרסולפון (PES) בגודל 2 ס"מ x 7 ס"מ עם גודל נקבוביות של 0.2 מיקרומטר לתחתית הבארות המגולחות באמצעות דבק אוצר UV. יש להמתין זמן אצירה של 30 דקות כדי להבטיח שהדבק נרפא לחלוטין ואינו פעיל.
4. באמצעות מכונת כרסום, חתכו שני חריצים אורכיים (1.5 מ"מ x 5.6 מ"מ) לאורך הצדדים כדי להיצמד לרכסים של החדר השלישי שזה עתה יוצר.
5. באמצעות מכונת כרסום, צור תא פוליקרבונט שלישי המשכפל את הממדים הכוללים של לוח מנתח התא; 72 מ"מ x 18 מ"מ (רשימת חומרים

Results

איור 1: תמונות של תאי המערך ושינויים.

(A) שלושת התאים ששימשו לבניית המערך. לא נעשה שינוי בתא העליון המכיל את האלקטרודות. (ב) מבארות החדר האמצעיות גולח גובה של 2 מ"מ ומחובר קרום לקרקעית הפתוחה; חרכי אורך (1.5 מ"מ x 5.6 מ"מ) נוספו לכל צד. (C) תא תחתון (72 מ"מ x 18 מ"מ) שיוצר כדי לשכפל את העיצוב של 16 בארות; בארות הן 4.8 מ"מ .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.05% טריפסין-EDTA	תרמופישר	25300-054
דבק	דבק אופטי נורלנד	NOA63
אלבומין בסרום בקר (BSA)	סיגמא	A9418
מרים תאים	זארשטדט	83.1832
רעלן כולרה מבית Vibrio cholerae	תרמופישר	12585-014
צלחת CIM	Agilent 5665817001		צלחת מנתח תאים
Collagenase מ Clostridium histolyticum	סיגמא	C0130
DMEM	תרמופישר	11995-065
DMEM-F12	תרמופישר	11875-093
סרום בקר עוברי (FBS), מנוטרל בחום	אומגה סיינטיפיק	FB-12
HEPES	תרמופישר	15630106
סרום סוסים (HS)	גיבקו	16050-122
EGF אנושי	פפרוטק	AF-100-15
הידרוקורטיזון	סיגמא	H4001
אינסולין טרנספרין סלניום אתנולמין (ITSX) (100x)	תרמופישר	51500056
אינסולין, רקומביננטי אנושי, תמיסת אבץ	סיגמא	C8052
J2 פיברובלסטים	תאי גזע (RRID:CVCL_W667)	100-0353
LymphoPrep	תאי גזע	7851	מדיום שיפוע צפיפות לבידוד תאים חד-גרעיניים
מטריג'ל	קורנינג	354230	מטריצת קרום מרתף
תאי MCFDCIS.com (DCIS)	RRID:CVCL_5552
תאי MDA-MB-231	RRID:CVCL_0062
מכונת כרסום			ברידג'פורט סדרה 1 אנכי
מלח חוצץ פוספט (1x)	תרמופישר	10010049
קרום פוליאתרסולפון (PES)	סטרליטק	PCTF029030
פתרון ליזה RBC	תאי גזע	7800
מנתח DP RTCA	אג'ילנט	3X16	מנתח תאים דו-תכליתי
טריפסין	סיגמא	T4799