בדיקת הנבטת חרוזים להערכת אנגיוגנזה בשלב מוקדם: מודל מבוסס חרוזים במבחנה לחקר הנבטת אנדותל בנוכחות פריציטים

תקציר

מקור: עזאם, S. H. et al. שילוב פריציטים בבדיקת הנבטת חרוזים של תאי אנדותל. J. Vis. Exp. (2018).

סרטון זה מדגים בדיקה מבוססת חרוזים מיקרו-נשאים המשלבת פריציטים לחקר הנבטת אנדותל בשלבים המוקדמים של אנגיוגנזה. הבדיקה מספקת מודל ניסויי במבחנה להבנת מנגנונים מולקולריים של אנגיוגנזה ואת ההשפעה של טיפולים אנטי-אנגיוגנטיים.

פרוטוקול

1. הכנת חרוזים להשתלת ג'ל

1. קח תרבית המכילה חרוזי מיקרו-נשא המצופים בתאי אנדותל של וריד הטבור האנושי (HUVEC) ופריציטים.
2. בחנו את הכלים המכילים את החרוזים המצופים במיקרו-נשא תחת המיקרוסקופ באמצעות המטרה 20X כדי לוודא שכל החרוזים צופו מספיק על ידי תאי אנדותל.
3. פיפטה נמרצת של תמיסה מצופה של תאים לנתק אותם מן הצלחת 6 ס"מ ומניחים את התמיסה לתוך צינור. שטפו את הצלחת פעמיים נוספות עם מדיה מלאה והעבירו לצינור כדי לאסוף את כל שאריות החרוזים שניתן להדביק לצלחת.
   1. הימנעו מהחדרת בועות אוויר והשתמשו בפיפט p1000 כדי למזער את לחץ הגזירה על החרוזים המצופים בתאי אנדותל.
4. המתן 3 דקות כדי לאפשר לחרוזים בתמיסה לשקוע לתחתית הצינ....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
טיפים סטריליים לפיפטה	VWR
פיפטורים	אפנדורף
ערכת תבליט מדיה EGM2 מלאה	לונזה	CC-3162	HUVEC מדיה
ממ	גיבקו	11095114	10T1/2 מדיה
DMEM	גיבקו	11965118	מדיה NHLF
PBS ברמת תרבית רקמה	גיבקו	14190-144	ללא מגנזיום וסידן
אקוטאזה	לייף טכנולוגיות	A1110501	להרמת HUVEC
טריפסין	לייף טכנולוגיות	15050065	להרמת 10T 1/2 ו- NHLF
HUVEC	לונזה	C2517A
10T 1/2	ATCC
NHLF	ATCC
Cytodex 3 חרוזי מיקרו-נשא	סיגמא	C3275
פלטות מצופות תרבית רקמה בקוטר 6 ו-10 ס"מ	קורנינג
פיברינוגן מפלזמה של בקר	סיגמא	F8630
טרומבין	סיגמא	T9549
אפרוטינין	סיגמא	A3428
צינורות בז בעלי תחתית עגולה	קורנינג
אינקובטור תרבית רקמות ומכסה מנוע
לוחות תחתונים מזכוכית 24 בארות	מאטק	P24G1.513F	לוחות תחתית זכוכית נחוצים רק אם הנבטים הולכים להיות מצולמים. אם לא, פלסטיק תרבית רקמות מקובל גם.