$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל ההליכים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. בדיקת האכלת דם למבוגרים (מנה נקודתית בודדת או בדיקת מנה-תגובה)
- אספו כ-150 נקבות יתושים בוגרות בנות 4-5 ימים והעבירו לכלוב נפרד. יש לחזור על הפעולה כדי להשיג 6 כלובים אם מבצעים בדיקת מנה-תגובה. יש להסיר את מקור הסוכר 1-24 שעות לפני בדיקת ההאכלה.
- הכינו תמיסת מלאי של כימיה כמתואר לעיל, תוך התחשבות בטוהר הכימיה (תמיסת מלאי טיפוסית היא 80 מילימטר במים או בחיץ מלח), ולאחר מכן הכינו דילולים סדרתיים במים/חיץ לפי הצורך.
- הוסף 40 μL של כל אחד מהדילולים ל 960 μL של דם ארנב defibrinated כדי לקבל את ריכוז הבדיקה הרצוי. יש למרוח סרט ממברנה על יחידת האכלה ולאטום באמצעות טבעת גומי. מעבירים 1 מ"ל דם באמצעות פיפטה ומחברים את יחידת ההזנה ליחידת חימום.
- יש לספוג בעדינות את פני הממברנה בתמיסת 10% חומצה לקטית טרייה ולהכניס את יחידת ההאכלה לכלוב של יתושים בוגרים. כסו את הכלוב בבד כהה או בשקית אשפה שחורה ואפשרו ליתושים להאכיל במשך שעה.
- חזור על שלבים 1.2 - 1.4 עבור שאר תמיסות הבדיקה והבקרה השלילית (דם בלבד).
- בסיום ההאכלה, הניחו דליים בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס במקרר למשך 5 דקות כדי להרדים יתושים. הסר יתושים זכרים ויתושים נקבות שאינן מוזנות, וספור ורשום את המספר הכולל של יתושים שניזונו והוזנו חלקית על ידי בדיקת הבטן.
- שמרו על נקבות יתושים שניזונו באופן חלקי ומלא, במטרה להגיע למינימום של 50 יתושים הניזונים מדם בכל מנה.
- העבירו דליים לאמבט פלסטיק או לתא גידול בתנאים קבועים של 28°C ו-75%-85% לחות יחסית (במחזור של 12 שעות ביום / 12 שעות בלילה עדיף).
- רשום את המספר הכולל של יתושים מתים/לא מגיבים ב-0.5, 1, 1.5, 2, 24, 48 ו-72 שעות (או נקודות זמן חלופיות לפי הצורך) באמצעות גיליון הניקוד (טבלה 1).
- ביום השלישי לאחר האכלת הדם, הכניסו ביצים לכלוב ואספו ביצים במשך תקופה של 72 שעות. יש לספור את המספר הכולל של הביציות המיוצרות בכל טיפול תחת מיקרוסקופ נתיחה.
- חישוב אחוזי התמותה והצואה כפונקציה של המספר הכולל של יתושים מוזנים עבור כל קבוצת טיפול והביקורת. נכון לבקרת תמותה באמצעות הנוסחה של Abbott ששונתה, אם תרצה בכך.
- הצג נתוני רעילות ופריון כתרשים היסטוגרמה או עקומה מעריכית (אם מבצעים בדיקת מנה-תגובה) באמצעות תוכנה לפי בחירה. אם אתה מבצע בדיקת מנה-תגובה, חשב את הערך LD50, LD75 או LD90 עבור הכימיה של הבדיקה ביחס לביקורת.
- חזור על הבדיקה לפחות פעמיים באמצעות קבוצות נפרדות של יתושים כדי לקבל n = 3 או יותר עותקים ביולוגיים.
טבלה 1. גיליון ציונים לדוגמה המשמש לרישום נתונים מבדיקת הזנת הדם של המבוגרים.מינונים אופייניים המשמשים לבדיקת כימיה אנטגוניסטית של מולקולות קטנות כגון amitriptyline הם 50 μM, 100 μM, 200 μM ו- 400 μM.
| יתוש מבוגר (בן 3-5 ימים) בדיקה מקומית |
| תאריך הפעלה: |
| חוקר: |
| מין/זן: |
| סוג מבחן: מנה נקודתית/מנה-תגובה |
| A. תמותה (לא. יתושים מתים) |
| שעה (שעות) | מנה 1 | מנה 2 | מנה 3 | מינון 4 | מנה 5 | לשלוט |
| 0.5 | | | | | | |
| 1 | | | | | | |
| 1.5 | | | | | | |
| 2 | | | | | | |
| 2.5 | | | | | | |
| B. אחוז תמותה |
| שעה (שעות) | מנה 1 | מנה 2 | מנה 3 | מינון 4 | מנה 5 | לשלוט |
| 0.5 | | | | | | |
| 1 | | | | | | |
| 1.5 | | | | | | |
| 2 | | | | | | |
| 2.5 | | | | | | |