בדיקת פלאק וירוס: טכניקה למדידת וירוס הרפס סימפלקס זיהומי באמצעות כימות של רבדים שנוצרו בשכבה אחת של תאים נגועים בנגיף

Abstract

מקור: Sadowski, L. A. et al. Plaquing of Herpes Simplex Viruses. J. Vis. Exp. (2021)

סרטון זה מתאר את בדיקת רובד הנגיף של נגיף הרפס סימפלקס מדבק או HSV. החלקיקים הנגיפיים המדוללים מחוסנים לשכבה החד-שכבתית של תאי אפיתל. עם הדגירה, הנגיף יוצר פלאקים ונספר חזותית כדי לקבוע את titer הנגיף זיהומיות.

Protocol

1. זריעה של תאי Vero

1. יום לפני תחילת בדיקת הפלאק, טריפסינזה תאי ורו והשהתה אותם מחדש במדיום נשרים מעובדים רגילים של דולבקו (DMEM) והשלימו בהתאם למתודולוגיית תרבית התאים הסטנדרטית. להשעות מחדש את התאים טריפסיניים ב 10 מ"ל של DMEM לכל בקבוק T-75 של תאי Vero מפגש (~ 10⁷ תאים).
   הערה: DMEM משמש לבדיקות פלאק במקום אלפא-MEM מכיוון שהוא מאט מעט את קצב צמיחת התאים ומעדיף תוצאות טובות יותר של בדיקת פלאק.
2. ספור את התאים לפי השיטה המועדפת עליך (למשל, המוציטומטר סטנדרטי עם אי הכללת Trypan Blue).
3. זרע את התאים ב 4 x 10⁶ תאים / צלחת; עבור HSV-2, להשתמש 6-באר צלחות עם 2.5 מ"ל של DMEM (עם תוספים) לכל באר; ועבור....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
צלחות 12 בארות	קורנינג	3512
צלחות 6 בארות	קורנינג	3516
אלפא-מם	לונזה	12169F
אנטיביוטיקה/אנטי-מיקוטית	גיבקו	15240096
סגול קריסטל	אלפא עזר	B2193214
DMEM	גיבקו	11965092
PBS של Dulbecco (ללא Mg++ או Ca++)	גיבקו	14190144
נסיוב עגל עוברי	מיליפור-סיגמא	TMS-013-B
ל-אלניל-ל-גלוטמין (גלוטמקס)	גיבקו	GS07F161BA
המציטומטר	תרמו פישר	02-671-54
מתילצלולוז	מיליפור-סיגמא	27-441-0
סוכן רבעוני (Lysol I.C.)	תרמו פישר	NC9645698
כחול טריפאן	קורנינג	25900CI
טריפסין	ציטיבה	SH30042.01
תאי Vero	ATCC	CCL-81