הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
1.1K צפיות
⸱
8 ביולי 2025
מקור: Carvalho, M., et al., A Model of Epileptogenesis in Rhinal Cortex-Hippocampus Organotypic Slice Cultures. J. Vis. Exp. (2021)
סרטון זה מדגים את הטכניקה של הערכת מוות עצבי בפרוסות אורגנוטיפיות של קליפת המוח הרינלית-היפוקמפוס. מוות עצבי מתרחש באמצעות התקפים אפילפטיים מתפתחים - הדומים לאפילפסיה in vivo - ומתגלה באמצעות צביעה כפולה של התאים המתים באמצעות פרופידיום יודיד ואימונופלואורסנציה.
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. הכנת פרוסות קליפת המוח-היפוקמפוס
הערה: הכנת פרוסות קליפת המוח-היפוקמפוס משתמשת בחולדות P6-7 Sprague-Dawley.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
איור 1: הליך מפורט להכנת פרוסות אורגנוטיפיות של קליפת המוח הרינלית-היפוקמפוס. (A) הסר את המוח מהראש ומקם אותו ב-GBSS קר כקרח כשהמשטח הגבי פונה כלפי מעלה. (B) הכניסו את המלקחיים לתוך המוח הקטן. פתחו את המוח דרך קו האמצע והוציאו את הרקמה העודפת מעל ההיפוקמפוס. (C) עם מרית חתוכה מתחת להיפוקמפוס, כפי שמצוין על-ידי החיצים. (D) הניחו את שני ההיפוקמפוסים כשפניהם כלפי מעלה .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 50 מ"ל צינור צנטריפוגה, תחתית חרוטית | קורנינג | 430829 | |
| 70% אתנול | מנואל ויירה, Lda | UN1170 | |
| Anti-NeuN (ארנב) | וורפן | 16712943S | לדלל ביחס של 1:500 |
| תוסף B-27™ (50X), ללא סרום | תרמו פישר סיינטיפיק | 17504-044 | |
| להבים לידית אזמל | כלים מדעיים משובחים | 10011-00 | |
| אלבומין בסרום בקר (BSA) | NZYTech | MB04602 | 5% BSA משמש לדילול הנוגדנים הראשוניים. הוסף 0.5g BSA ב- PBS של 10 מ"ל. |
| מערכת תא פרוסת מוח/רקמה | וורנר אינסטרומנטס | ||
| תוספות תרבית תאים, 30 מ"מ, PTFE הידרופילי | Millipore SAS | PICM03050 | |
| מקור אור קר | שוט | KL 300 LED | |
| מיקרוסקופ לייזר קונפוקלי | זיס | LSM 710 | |
| חממה קונבנציונלית | Thermo Scientific Heraeus | BB15, שורת פונקציות | מוגדר ל-37°C ו-5% CO2 |
| D(+)-גלוקוז מונוהידראט | מרק מיליפור | 1.08342.1000 | |
| D-(+)-תמיסת גלוקוז, 45% במים | סיגמא | G8769 | |
| די-נתרן מימן פוספט דיהידראט | מרק מיליפור | 1.06580.1000 | |
| ניתוח מיקרוסקופ/זכוכית מגדלת | MEIJI טכנו ושות' בע מ | 122285 | |
| חמור נגד ארנב IgG (H+L) מצומד Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A21206 | לדלל ביחס של 1:500 |
| Dumont #5 מלקחיים עדינים Biologie Inox | כלים מדעיים משובחים | 11254-20 | |
| Dumont #5 מלקחיים סטנדרטי Inox | כלים מדעיים משובחים | 11251-20 | |
| Dumont #7 מלקחיים סטנדרטי Dumoxel | כלים מדעיים משובחים | 11271-30 | |
| Dumont Medical #7S מלקחיים עקומה קצרה Inox | כלים מדעיים משובחים | 11273-22 | |
| תמיסת מלאי Gentamycin, 50 מ"ג/מ"ל | תרמו פישר סיינטיפיק | 15750-037 | |
| תמיסת מלח מאוזנת של Gey (GBSS) | תעשיות ביולוגיות | 01-919-1א | |
| אלקטרודות זכוכית | מוצרים מדעיים | GB150F-10 | טיפים עגולים תוצרת בית |
| פיפטות פסטר זכוכית, 230 מ"מ | VWR הבינלאומי | 612-1702 | |
| תמיסת מלח מאוזנת של האנק (HBSS) | תרמו פישר סיינטיפיק | 24020-091 | |
| סרום סוסים, מנוטרל בחום (HS) | |||
| חומצה הידרוכלורית | תרמו פישר סיינטיפיק | 26050-088 | |
| עט הידרופובי | מרק מיליפור | 1.09057.1000 | |
| INCU-Line IL10 | דקו | S200230-2 | |
| איריס מרית מעוקלת | וורנר אינסטרומנטס | BSC-HT האס עליון | |
| Labculture Class II ארון בטיחות ביולוגי | כלים מדעיים משובחים | 10092-12 | |
| נייר ניקוי לעדשות | הראספה | HS 12 | |
| תמיסת L-גלוטמין 200 מ"מ (Q) | טיפן | ||
| מיקרו צינור 0.5 מ"ל, PP | מרק מיליפור | 1.05886.0500 | |
| מיקרו צינור 1.5 מ"ל, PP | זארשטדט | 72,699 | |
| מיקרו צינור 2.0 מ"ל, PP | זארשטדט | 72.690.001 | |
| משקפי כיסוי מירוסקופ, 24 מ"מ x 60 מ"מ | סאטר אינסטרומנט | MP-285 | |
| לק | מרינפלד | 102242 | |
| Neurobasal-A בינוני (NBA) | קלישאה | ||
| Opti-MEM® I סרום מופחת בינוני | תרמו פישר סיינטיפיק | 10888-022 | |
| Paraformaldehyde, אבקה | תרמו פישר סיינטיפיק | 31985-047 | |
| משאבה פריסטלטית | VWR כימיקלים | 2,87,94,295 | |
| חיץ מי מלח פוספט (PBS) | גילסון | M312 | |
| פתרונות סטנדרטיים פוספט, PO43- במים | תוצרת בית. PBS עם 0.5% Tween-20 (PBS-T) משמש לשטיפת פרוסות במהלך בדיקת אימונוהיסטוכימיה. | ||
| סט פיפטות | BDH אריסטאר | 452232ג | |
| פלטינום 5 להבים | גילסון | P2, P10, P20, P100, P200, P1000 | |
| פרופידיום יודיד (PI) | סיגמא-אולדריץ' | P5405-250g | |
| נייר סינון איכותי, תאית, דרגה 1, 55 מ"מ | סיגמא-אולדריץ' | P4170-25MG | מלאי תמיסה ב 1 מ"ג / מ"ל במים. |
| נייר סינון איכותי, תאית, דרגה 1, 90 מ"מ | מה איש | 1001-055 | שימור בינוני 11 מיקרומטר |
| ידית אזמל | מה איש | 1001-090 | שימור בינוני 11 מיקרומטר |
| קצה החלקה מזרק אינסולין ללא מחט 1 מ"ל | כלים מדעיים משובחים | 91003-12 | |
| מספריים לסטודנטים ישר חדחדות 12 ס"מ | קבוצת מוצרי GRASS של Astro Med Inc | S48 ממריץ | |
| שקופיות הדבקה SuperFrost Plus™ | כלים מדעיים משובחים | 91402-12 | |
| צלחת תרבית רקמות סטרילית 60 x 15 מ"מ שטופלה ב- TC | תרמו פישר סיינטיפיק | J1800AMNZ | |
| צלחות סטריליות 6 בארות מטופלות TC | קורנינג | CORN430166 | |
| קוצץ רקמות | חברת מערכות רפואיות | TC-102 | |
| טריטון X-100 | מיקל מעבדה הנדסה ושות 'בע"מ | MTC/2 | הגדר ל- 350 מיקרומטר |
| טווין-20 | ב.ד.ה | 14630 | |
| סיגמא | עמ' 2287 |
