בדיקה קולורימטרית לכימות לקטט בדגימות בדיקה

תקציר

מקור: Yanase, S., et al. בדיקות קולורימטריות בקנה מידה קטן של לקטט תוך תאי ופירובט בנמטודה Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2018).

סרטון וידאו זה מתאר בדיקה קולורימטרית למדידת לקטט בליזטים של תאים באמצעות האנזים לקטט דהידרוגנאז. אנזים זה ממיר לקטט לפירובט, יחד עם המרה של NAD ל-NADH שמגיב עם צבעי טטרזוליום ונותן תוצר צבעוני שניתן למדוד ספקטרופוטומטרית כדי לכמת את הלקטט.

פרוטוקול

1. תרבות מסונכרנת של C. elegans

1. לפני הזריעה, תרבית את זן Escherichia coli (E. coli) OP50 למשך הלילה ב 37 ° C ב 300 מ"ל של Luria-Bertani (LB) מרק בינוני נוזלי. אחסנו את OP50 המתורבת בטמפרטורה של -4°C.
   1. כדי להפוך את מרק LB למדיום נוזלי, השתמשו ב-10 גרם טריפטון, 5 גרם תמצית שמרים, 10 גרם NaCl ו-1.5 מ"ל של 1 N NaOH, והוסיפו ל-1 ליטר עם מים נטולי יונים. Autoclave.
      הערה: זני OP50 ו-C. elegans זמינים במרכז Caenorhabditis Genetics Center (אוניברסיטת מינסוטה, סנט פול, מינסוטה, ארה"ב).
2. כדי ליצור אגר בינוני גידול נמטודות (NGM), השתמש 3 גרם של NaCl, 2.5 גרם של פפטון, 17 גרם....

תוצאות

איור 1. תהליך להפקת מטבוליטים תאיים. (A) 1,500-3,000 תולעים הונחו על צלחת אגר NGM (צלחת פטרי 90 מ"מ). מיצוי מתולעים על חמש צלחות הספיק לבדיקות קולורימטריות. (B) תולעים שנאספו מחמש לוחיות של 3,000 ו-1,500 תולעים בכל צלחת מסומנות בצד שמאל וימין של הלוח, בהתאמה. שני הנפחים הרטובים בכל צינור של 15 מ"ל הם < 0.5 מ"ל, שהספיקו לגילוי. (C).......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
ערכת בדיקת Lactate Colorimetric/Fluorimetric	ביוויז'ן	#K607-100	colorimetric/fluorimetric 100 בדיקות; יש לאחסן בטמפרטורה של -20oC
חומצה טריכלורואצטית	Wako כימיקל טהור	#207-04955	יש לאחסן בטמפרטורת החדר
הומוגנייזר טפלון	איוואקי/פירקס	#358034 (Wheaton)	במקום איוואקי/פירקס זמין על ידי Wheaton