Method Article

טכנולוגיית אינטרפרומטריה ביו-שכבתית לזיהוי אינטראקציות בין ליגנד לאנליט

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Desai, M., et al. יישום אינטרפרומטריה ביו-שכבתית (BLI) לחקר אינטראקציות חלבון-חלבון בשעתוק. J. Vis. Exp. (2019)

בסרטון זה, אנו מדגימים טכנולוגיית אינטרפרומטריה ביו-שכבתית (BLI) כדי לזהות את האינטראקציות הבין-מולקולריות בין ליגנדות ואנליטות מטרה בזמן אמת. BLI מודד שינויים בתבנית ההתאבכות של אור לבן המוחזר משכבה של ליגנדים משותקים על משטח ביו-סנסור בזמן שהם מתקשרים עם אנליטים בתמיסה.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. הידרציה ביו-חיישנית והגדרת בדיקה

  1. הפעל את מכונת BLItz.
  2. ודא שההתקן מחובר למחשב באמצעות יציאת פלט נתונים מסוג USB בחלק האחורי של ההתקן.
  3. במחשב, פתח את התוכנה המשויכת (לדוגמה, BLItz Pro), ולחץ על Advanced Kinetics בצד שמאל של המסך.
  4. בתוכנה, הקלד את כל המידע המתאים על הניסוי (כולל שם הניסוי, תיאור, מזהה דגימה וריכוז חלבונים) תחת כל כותרת מתאימה.
  5. לחץ על Biosensor Type ובחר Ni-NTA מהתפריט הנפתח.
    1. תחת הכותרת הפעל הגדרות, ודא שה- Shaker מוגדר ל- Enable.
    2. תחת הכותרת רשימת סוג שלב, ודא שרשומים 5 פריטים: בס....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
מכונת BLItzForteBio45-5000מכשיר
טבילה וקריאה של מגש ביוסנסור Ni-NTAForteBio18-5101ביו-חיישנים מוכנים לשימוש של Ni-NTA עבור חלבונים המתויגים בפולי-היס
מחזיק טיפהForteBio45-5004מכשיר
צינורות PCR (0.2 מ"ל)תומאס סיינטיפיקCLS6571כלי פלסטיק
צינורות מיקרוצנטריפוגות (שחור)תרמו פישר סיינטיפיק03-391-166כלי פלסטיק
מגבוניםתרמו פישר סיינטיפיק06-666אכלי פלסטיק
DTTתרמו פישר סיינטיפיק₪2000כימי
EDTAMilliporeSigmaE6758כימי
MgCl2MilliporeSigmaM8266כימי
NaClMilliporeSigmaS9888כימי
Tris-HClגולדביוT095100מאגר

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Biolayer InterferometryLigand Analyte InteractionNi NTA BiosensorHistidine Tagged LigandWavelength Shift MeasurementAssociation Dissociation KineticsBLI Buffer SystemFiber Optic BiosensorBLItz InstrumentAdvanced Kinetics Software

Related Articles