Method Article

יצירת צמתים עצביים-שריריים באמצעות מכשיר מיקרופלואידי

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Stoklund Dittlau, K. et al., דור של יחידות מוטוריות אנושיות עם צמתים עצביים-שריריים פונקציונליים בהתקנים מיקרופלואידים.J. Vis. Exp. (2021)

הסרטון מדגים היווצרות של צמתים עצביים-שריריים באמצעות מכשיר מיקרופלואידי. תאים מבשרים עצביים ותאי אב שריריים נזרעים לבארות שונות בתוך המכשיר ונשארים להבשיל לנוירונים מוטוריים ולצינורות מיו, בהתאמה. יצירת נפח ושיפוע כימי מובילה להתפתחות של צמתים נוירומוסקולריים פעילים.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההליכים הכרוכים באיסוף דגימות בוצעו בהתאם להנחיות IRB של המכון.

כל הריאגנטים והציוד המשמשים בפרוטוקול זה מפורטים בטבלת החומרים ויש להשתמש בהם סטריליים. יש לחמם את המדיה לטמפרטורת החדר (RT) לפני השימוש, אלא אם צוין אחרת. לקבלת סקירה כללית של פרוטוקול התרבות המשותפת, ראה איור 1.

1. התמיינות של אבות נוירונים מוטוריים מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSCs)

  1. עקוב אחר פרוטוקול התמיינות הנוירונים המוטוריים, שהותאם ממחקר קודם, עד שתגיע למצב האב העצבי (NPCs) ביום 10. על פי מסגרת הזמן של הפרוטוקול, ההבחנה מתחילה ביום שני (יום 0), מה שמביא ליום 10 NPCs ביום חמי....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
איור 1: סקירה סכמטית של פרוטוקול יחידת המנוע בהתקנים מיקרופלואידים.ציר זמן של התמיינות וסקירה כללית של תרבות משותפת מהיום ה-0 עד היום ה-28 בהתאם לציר הזמן של פרוטוקול התמיינות הנוירונים המוטוריים. התמיינות נוירונים מוטוריים מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים מתחילה ביום 0 ומבוצעת כאמור במשך 10 הימים הבאים. ביום 9, המכשיר מעוקר ומצופה ב- PLO-laminin. MABs מופשרים לצורך הרחבה בצלוחיות T75. ביום ה-10, תאי הע.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
חומצה אצטיתCHEM-Lab NVCL00.0116.1000רכיב ציפוי. H226, H314. עמ' 280
אגרין (חלבון אנושי רקומביננטי)מערכות מו"פ6624-AG-050מוסף מדיה
חומצה אסקורביתסיגמאA4403רכיב מדיה
βIII-טובולין (טובולין)אבקאםdorit_19751נוגדנים (1:500)
β-מרקפטואתנולתרמו פישר סיינטיפיק31350010רכיב מדיה. ח317. עמ' 280.
B-27 ללא ויטמין Aתרמו פישר סיינטיפיק12587-010רכיב מדיה
BDNF (גורם נוירוטרופי מוחי)פפרוטק450-02בגורם גדילה
bFGF (גורם גדילה פיברובלסט בסיסי אנושי רקומביננטי)פפרוטק100-18 ב'גורם גדילה
קולגן מעור עגלתרמו פישר סיינטיפיק17104019רכיב ציפוי
CNTF (גורם נוירוטרופי ריסני)פפרוטק450-13בגורם גדילה
דאפטטוקריס ביוסיינס2634מוסף מדיה
DMEM/F12תרמו פישר סיינטיפיק11330032רכיב מדיה
DMSOסיגמאD2650-100MLרכיב שימור קריוגני. H315, H319, H335. עמ' 280.
מלח חוצץ פוספט של Dulbecco (DPBS)תרמו פישר סיינטיפיק14190250ללא סידן, ללא מגנזיום
אתנולVWR20.821.296עיקור. ח225. עמ' 280
סרום בקר עובריתרמו פישר סיינטיפיק10270106רכיב מדיה
אמצעי הרכבה פלואורסצנטידקוS3023רכיב אימונוציטוכימי
GDNF (גורם נוירוטרופי הנגזר מקו תאי גלייה)פפרוטק450-10 ב'גורם גדילה
נסיוב סוסיםתרמו פישר סיינטיפיק16050122רכיב מדיה
IMDMתרמו פישר סיינטיפיק12440053רכיב מדיה
אינסולין טרנספרין סלניוםתרמו פישר סיינטיפיק41400045רכיב מדיה
החלפת סרום נוקאאוטתרמו פישר סיינטיפיק10828-028רכיב שימור בהקפאה
Laminin מ Engelbreth-Holm-נחיל מורין סרקומה מרתף קרום מרתףסיגמאL2020-1MGרכיב ציפוי ותוספת מדיה
ל-גלוטמיןתרמו פישר סיינטיפיק25030-024רכיב מדיה
תוספת N-2תרמו פישר סיינטיפיק17502-048רכיב מדיה
מדיום נוירובזאליתרמו פישר סיינטיפיק21103049ציפוי ורכיב מדיה
חומצות אמינו לא חיוניותתרמו פישר סיינטיפיק11140050רכיב מדיה
פארפילם מסיגמאP7793-1EAאחסון ציוד
פניצילין/סטרפטומיצין (5000 U/מ"ל)תרמו פישר סיינטיפיק15070063רכיב מדיה
צלחת פטרי (3 ס"מ)אנונימי153066קוטר: 3 ס"מ
צלחת פטרי (10 ס"מ)זארשטדט833.902קוטר: 10 ס"מ
צלחת (6 באר)סלסטאר גריינר ביו-וואן657160צלחת תרבות
פולי-L-אורניתין (אש"ף)סיגמאP3655-100MGרכיב ציפוי
חומצה רטינואיתסיגמא₪625מוסף מדיה. H302, H315, H360FD, H410. עמ' 280.
תוסף תאי Revitaתרמו פישר סיינטיפיקA2644501פתרון מעכב ROCK
אגוניסט מוחלקמרצ' מיליפור566660מוסף מדיה
נתרן פירובטלייף טכנולוגיות11360-070רכיב מדיה
בקבוק T75סיגמאCLS3276צלחת תרבות
TrypLE אקספרסתרמו פישר סיינטיפיק12605010פתרון דיסוציאציה MAB
טובוצירין הידרוכלוריד פנטהידראטסיגמאT2379-100Gחוסם קולטן אצטילכולין. ח301. עמ' 280.
XonaChips מכשיר מיקרופלואידי שהורכב מראשXona MicrofluidicsXC150אורך מיקרו-חריץ: 150 מיקרומטר

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Neuromuscular JunctionsMicrofluidic DeviceNeural Progenitor CellsMuscle Progenitor CellsMotor NeuronsMyotubesMicrogroovesCell SeedingGrowth MediumDifferentiation Medium

Related Articles