Method Article

הכנת פרוסות טריז במוח כדי להמחיש נוירונים שמיעתיים

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Fischl, M. J. et al., הכנת פרוסת טריז חוץ גופית לחיקוי קישוריות מעגל עצבי Vivo.J. Vis. Exp.(2020)

סרטון זה מדגים את התהליך של הכנת פרוסות מוח בצורת טריז בסביבת מעבדה. באמצעות ויברטום, פרוסה בצורת טריז ממוחו של עכבר מעוצבת בעובי משתנה. פרוסה זו מכילה את שורש עצב השמיעה הממוקם בקצה העבה יותר, בעוד שהנוירונים הקשורים לשמיעה ממוקמים בקצה הדק יותר.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הסרת מוח עם שורש עצב שמיעה שלם לגירוי

הערה: עכברים עבור ניסויים אלה הושגו על ידי חציית עכברים טרנסגניים ChAT-IRES-Cre על רקע C57BL/6J עם עכברי כתב tdTomato (Ai14). עכברים ששימשו להיסטולוגיה ולאלקטרופיזיולוגיה היו לאחר הופעת שמיעה (P14-P23), שזה בערך P12 בעכברים. תאי עצב המבטאים tdTomato בגרעין הגחון של גוף הטרפז (VNTB) אופיינו בעבר כנוירונים אוליבוקוכלריים מדיאליים (MOC) בקו עכבר זה.

  1. הרדימו (למשל, חנקCO2) וערפו את ראשו של בעל ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
איור 1: פרוסת טריז סכמטית ותמונה לדוגמה. (A) סכמטי של מעגל המשוב האוליבוקוכלרי המדיאלי. חיצים כחולים מציינים את המסלול העולה האפרנטי לנוירוני MOC, וחצים שחורים מציינים את מסלול המשוב היורד מתאי עצב MOC לבסיס תאי השערה החיצוניים (OHC). (B) תמונת שדה בהיר של פרוסת טריז עם תוויות של שורש עצב השמיעה (ANR) וגרעין השבלול (מתאר מקווקו) בצד העבה. הכוכבית מציינת את המיקום המש.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
תכשירים ניסיוניים
אגר, אבקהפישר סיינטיפיקBP1423500בלוק אגר 4% המשמש לייצוב רקמת המוח במהלך חתך ויברטומי
AlexaFluor Hydrazide 488InvitrogenA10436פלואורופור המשמש בתמיסה פנימית לאישור תיקון נוירון MOC מוצלח
איזון אנליטיג'נסיס סיינטיפיק (Intramalls)AV114שקילת כימיקלים
סכין גילוח פיפיותטד פלה121-6להב חיתוך Vibratome
חומצה Kynurenic (5 גרם)סיגמא אולדריץ'K3375-5Gחיתוך תוסף ACSF המשמש להפחתת פעילות הנוירונים במהלך דיסקציה וחיתוך על מנת לשפר את בריאות הרקמה להידוק טלאי
מד pHפישר סיינטיפיק (אינטרקניונים)13-620-451בודק pH פתרון
צלחות פטרי מפלסטיק קוטר 100 מ"מ X 20 מ"מפישר סיינטיפיק (אינטרקניונים)12-556-0024% אגר פרפ
ערבוב פלטהפישר סיינטיפיק (אינטרקניונים)11-500-150חימום להכנת אגר 4%
נתיחה וחיתוך
ביוציטיןסיגמא אולדריץ'B4261-250MGכימיקל המשמש למעקב אקסונלי (מצומד לסטרפטאווידין 488)
מיקרוסקופ מנתחאמסקופSM-1BNלדיסקציה מדויקת במהלך הסרת המוח
Dumont #5 מלקחייםכלים מדעיים משובחים11252-20כלי דיסקציה של מלקחיים עדינים
פינצטה חסכונית #3WPI501976כלי דיסקציה של מלקחיים
צלחת פטרי זכוכית קוטר 150 מ"מ × גובה 15 מ"מפישר סיינטיפיק (אינטרקניונים)08-747Eצלחת דיסקציה
נייר ממשק (203 x 254mm PCTE Membrane 10um)תומאס סיינטיפיק1220823דגירה של פרוסות/יישום ביוציטין
Leica VT1200S Vibratomeלייקה1491200S001Vibratome עבור חתך פרוסת טריז
מספריים של מאיורובוזRS-6872הכלי דיסקציה
להבי פלדת פחמן חד-צדדייםפישר סיינטיפיק (אינטרקניונים)12-640סכין גילוח לדיסקציה
דיסק דגימה, כיווןלייקה14048142068שלב ויברטומי מיוחד להטיה הניתנת לשחזור
כפיותפישרסקי14-375-10הכלי דיסקציה
דבק סופרניואג15187משמש להדבקת רקמה לשלב הוויברטומה
מספריים קפיץ Vannasכלים מדעיים משובחים91500-09הכלי דיסקציה

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Wedge Brain SlicesAuditory NeuronsVibratome SlicingBrain DissectionAuditory Nerve RootCochlear NerveMedial Olivocochlear NeuronsTrapezoid BodyAgar Block StabilizationCarbogen Bubbled Solution

Related Articles