מאמר שיטה

תכנות מחדש ישיר של תאי אב המטופויטיים לתאי גזע עצביים

8 ביולי 2025

במאמר זה

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Wang, T., et al. אינדוקציה ישירה של תאי גזע עצביים אנושיים מתאי אב המטופויטיים היקפיים בדם. J. Vis. Exp, (2015)

סרטון זה מדגים תכנות מחדש ישיר של תאי אב המטופויטיים מהונדסים גנטית לתאי גזע עצביים. גורמי שעתוק המבוטאים על ידי תאי אב המטופויטיים מעוררים שרשרת של אירועים מולקולריים המאפשרים את טרנספורמציה. מדיה ספציפית נוספת משמשת לבחירה ולגידול של תאי גזע עצביים מושרים.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. השראת תאי גזע עצביים

הערה: בהתאם לתנאי התא, כ-5 או 7 ימים לאחר הטרנספקציה, תאים חד-שכבתיים נצמדים יגיעו למפגש של 30-50% (איור 1C).

  1. הסר את supernatants המכילים תאים צפים וכדורים ולאחר מכן להוסיף 1 מ"ל של תווך אב עצבי (Dulbecco's Modified Eagle Medium: Nutrient Blend Blend Medium: Nutrient Blend F-12 (DMEM/F12), המכיל תוסף N2 1x, אלבומין בסרום בקר (BSA) 0.1% (w/v), אנטיביוטיקה 1% (v/v), 20 נ"ג/מ"ל של גורם גדילה פיברובלסט בסיסי (bFGF) ו-20 נ"ג/מ"ל של גורם גדילה אפידרמלי (EGF)) לתאים הדבקים.
  2. לחלופין, נתק את כדורי התא על ידי צנטריפוגה עדינה של התאים ב 170 x גרם למשך 10 דקות. הסר את supernatant ו resuspend את התאים ב 1 מ"ל של תווך אב עצבי בצלחת חדשה 24 בארות מצופה matrigel לכל הוראה כגיבוי.
  3. שנה את המדיום כל יומיים עד שהתאים מגיעים 60 - 80% קונפלואנט, בדרך כלל לאחר שבוע.
  4. יש להשליך את הסופרנאטנט ולהוסיף 1 מ"ל של מדיום תאי גזע עצביים (מדיום ללא סרום, NSC SFM). נתקו את התאים באמצעות מגרד תאים, ואחריו פיפטינג עדין מאוד.
  5. מוציאים את התאים וזורעים את כולם לבאר אחת של צלחת בת 6 בארות. הוסף עוד 1 מ"ל של מדיום תאי גזע עצביים כדי ליצור מדיה של 2 מ"ל לכל באר. לדגור על התאים ב 37 ° C באינקובטור 5% CO2.
  6. החליפו את המדיום אחת ליומיים.
  7. כאשר התאים מגיעים למפגש של 60%, התנתקו ולוחתו מחדש את התאים ביחס של 1:3 בעקבות השלבים ב-1.4 וב-1.6.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
איור 1. שינויים מורפולוגיים של תאי CD34 לאחר העברת נגיף סנדאי. (A) ניתן לראות מספר משמעותי של תאי CD34 בזמן הטרנספקציה. (B) ניתן לצפות בצברי תאים דמויי כדור 24 שעות לאחר העברת נגיף סנדאי, אשר מתרחב עם הזמן. (C) לרוב, תאים דבקים דו קוטביים הופיעו לאחר 5 ימים של טרנספקציה. (D ו-E) מורפולוגיות אופייניות של תאי גזע עצביי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מגרד תאיםזארשטדט83.183
DMEM/F12טכנולוגיות חיים12400-024פי 1
תוספת N2טכנולוגיות חיים17502-048פי 1
אלבומין בסרום בקרסיגמאA29340.1% (עם V/V)
bFGFפפרוטק100-18 ב'20 נ"ג/מ"ל
EGFפפרוטקAF-100-15
תוסף B27טכנולוגיות חיים17504-044פי 1
סרום NSC ללא מדיוםלייף טכנולוגיותA1050901פי 1

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Matrigel

מאמרים קשורים