מקור: Meyer, S., et al., Edenhofer, F. גזירה של פיברובלסטים אנושיים בוגרים והפיכתם הישירה לתאי אב עצביים הניתנים להרחבה. J. Vis. Exp. (2015)
סרטון זה מדגים את תהליך התמיינות תאי אב עצביים מושרים (iNPCs) לנוירונים ואסטרוציטים באמצעות מדיה מיוחדת.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
התמיינות תאי אב עצביים מושרים לאסטרוציטים
721 צפיות
⸱
8 ביולי 2025
במאמר זה
תקציר
פרוטוקול
1. הבחנה בין iNPCs
- הבחנה לקראת שושלת עצבית
- תאי תרבית על לוחות מצופים למינין כמתואר לעיל. יש לשנות את המדיה לנוירו-דיפ-מדיה (DMEM/F-12, 1x N2, 1x B27, 300 נ"ג/מ"ל cAMP, 200 מיקרומטר ויטמין C, 10 נ"ג/מ"ל BDNF, 10 נ"ג/מ"ל GDNF) כאשר התאים נפגשים בכ-70%. החליפו מדיה כל יומיים במשך שלושה שבועות. אין לפצל תאים במהלך ההתמיינות.
- לאחר שלושה שבועות, תאים צריכים לבטא את הסמן העצבי TUJ1. כדי להשיג נוירונים בוגרים יותר ותת-סוגים עצביים, המשך התמיינות עד 3 חודשים.
- הבחנה לקראת שושלת גליה
- שינוי מדיה לאינדוקציה גליה (1:1 DMEM/F-12: נוירובזל, 1x N2, 1x B27, 10 מיקרומטר β-מרקפטואתנול, 100 מיקרומטר חומצות אמינו לא חיוניות, 1.5 מילימטר L-גלוטמין, 5 מיקרוגרם/מ"ל אינסולין, 40 נ"ג/מ"ל T3) כולל 20 נ"ג/מ"ל EGF כדי לגרום להתמיינות לתאים מבשרי גלייה. הסר מחצית מהמדיה והחלף במדיה טרייה אחת ליומיים למשך כשבועיים. במהלך תקופה זו, תאים צריכים להיות מפוצלים 1: 3 בנוכחות 10 μM מעכב ROCK Y27632 כאשר 100% מפגש הוא הגיע.
- לאחר שבועיים, התמינו תאים עוד יותר לאסטרוציטים: כאשר התאים כמעט נפגשים, החליפו מדיה למדיה אסטרוציטית זמינה מסחרית, החליפו מדיה כל יומיים. לאחר כ-7 ימים, התאים מתחילים לבטא סמני אסטרוציטים (למשל, GFAP). אם התאים מקבלים 100% מפגש במהלך פרוטוקול ההתמיינות, לפצל אותם ביחס של 1:2 בנוכחות מעכב ROCK 10 מיקרומטר Y27632.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
לא הוכרז על ניגוד עניינים.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מדיה אסטרוציטית | ScienCell | 1801 | |
| B27 | לייף טכנולוגיות | 17504-044 | |
| BDNF | פפרוטק | 450-02 | |
| מחנה | סיגמא | A6885 | |
| DMEM | לייף טכנולוגיות | 41966-029 | |
| DMEM F12 | לייף טכנולוגיות | 11320-033 | |
| DMSO | רוט | 4720 | |
| DPBS | לייף טכנולוגיות | 14190-094 | |
| EGF | לייף טכנולוגיות | PHG0313 | |
| FCS | Biochrom AG | 50115 | |
| GDNF | פפרוטק | 450-10 | |
| אינסולין | סרלאב | GEM-700-112-P | |
| ל-גלוטמין | לייף טכנולוגיות | 25030-024 | |
| למינין | סיגמא | L2020 | |
| N2 | לייף טכנולוגיות | 17502-048 | |
| נוירובזל | לייף טכנולוגיות | 21103-049 | |
| חומצות אמינו לא חיוניות | לייף טכנולוגיות | 11140-050 | |
| ויטמין C | סיגמא | A4544 | |
| β-מרקפטואתנול | לייף טכנולוגיות | 21985023 |
