הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
1.2K צפיות
⸱
8 ביולי 2025
מקור: Xiao, W., et al. הידרוג'ל מבוסס חומצה היאלורונית לתרבית תלת ממדית של תאי גליובלסטומה שמקורם בחולה. J. Vis. Exp. (2018).
סרטון זה מדגים כיצד גליומאספירות, שמקורן בגידולי מוח, מופרדות לתאים בודדים ועטופות בהידרוג'ל המבוסס על חומצה היאלורונית. תהליך זה מקדם אינטראקציות בין תאים ויוצר מודל גליובלסטומה תלת-ממדי מובנה.
כל ההליכים הכרוכים באיסוף דגימות בוצעו בהתאם להנחיות IRB של המכון.
1. תיולציה של חומצה היאלורונית
NOTE: יחסים מולאריים מצוינים ביחס למספר כולל של קבוצות קרבוקסילט, אלא אם צוין אחרת.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
טבלה 1. פורמולציות הידרוג'ל המניבות בקרה עצמאית של ריכוז HA ותכונות מכניות.
| סוג ג'ל | חלק A (40 μL כל אחד) | חלק B (40 μL כל אחד) | ||||
| 4Arm-PEG-MAL (50 מ"ג/מ"ל) | ציסטאין או RGD (2.81mM) | PBS (pH 7........ | ||||
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מד pH | תרמו פישר | לא ישים | כל מד pH בעל רגישות pH 2-10 |
| מערבבים צלחת | תרמו פישר | לא ישים | ציוד מעבדה כללי |
| בקבוק Erlenmeyer (125 מ"ל) | תרמו פישר | FB-501-125 | |
| 2L פוליפרופילן beaker | תרמו פישר | S01916 | |
| נתרן היאלורונן | לייף קור | HA700K-5 | טווח 500-750 kDa |
| 1-אתיל-3-(3-דימתילאמינופרופיל) קרבודימיד (EDC) | תרמו פישר | PI-22980 | |
| N-הידרוקסיסוקסינימיד (NHS) | סיגמה אולדריץ' | 130672-5G | |
| חומצה הידרוכלורית (HCl) | תרמו פישר | SA48-500 | |
| נתרן הידרוקסידי (NaOH) | תרמו פישר | SS266-1 | |
| ציסטמין דיהידרוכלוריד | תרמו פישר | AC111770250 | |
| Dithiolthreitol (DTT) | תרמו פישר | BP172-25 | |
| מגיב הבדיקה של אלמן (5-(3-Carboxy-4-nitrophenyl)disulfanyl-2-nitrobenzoic חומצה | סיגמא אולדריץ' | D218200-1G | |
| מים מפוזרים (תחמוצת דאוטריום) | תרמו פישר | AC166301000 | |
| מסנן מונע ואקום 0.22μm | CellTreat | 229706 | |
| מלח חוצץ פוספט (PBS) | תרמו פישר | P32080-100T | |
| מלח מלח מאוזן של הנקס (HBSS) | תרמו פישר | MT-21-022-CV | |
| 4-זרוע-PEG-maleimide | טכנולוגיית JenKem | A7029-1 | משקל מולקולרי סביב 20kDa |
| 4-זרוע-PEG-תיול | טכנולוגיית JenKem | A7039-1 | משקל מולקולרי סביב 20kDa |
| ל-ציסטאין | סיגמה אולדריץ' | C7880-100G | |
| פפטיד חיקוי RGD ECM | Genscript ביוטק | לא ישים | פפטיד מותאם אישית עם רצף "GCGYGRGDSPG", N-terminal צריך להיות acetylated |
| תבניות סיליקון | סיגמא אולדריץ' | GBL664201-25EA | השתמש בסכין גילוח כדי לחתוך לחתיכות בודדות |
| מדיום תרבות שלם | מגוון | מגוון | DMEM/F12 (Thermofisher) עם תוסף שאינו בסרום (G21 מבית GeminiBio), גורם גדילה אפידרמיס 50ng/mL (Peprotech), גורם גדילה פיברובלסט 20ng/mL (PeproTech) והפראין 25μg/mL (Sigma Aldrich), מדיום התרבית משתנה במעבדות שונות |
| תאי GBM שמקורם במטופל | לא ישים | לא ישים | |
| Protease/phosphatase inhibitor mini tablet | סיגמה אולדריץ' | 5892970001 | |
| TrypLE אקספרס | תרמו פישר | 12604013 | |
| מסננת תאים 70μm | תרמו פישר | 22-363-548 | |
| אינקובטור תרביות תאים | תרמו פישר | לא ישים | כל אחד כללי עם 5% CO2 ו 37C |
| מקרר/מקפיא | תרמו פישר | לא ישים | כל ציוד מעבדה כללי עם קיבולת -20C ו- -80C |
| תבניות הטבעה חד פעמיות | תרמו פישר | 12-20 | |
| קצוות פיפטה רחבים | תרמו פישר | 9405120 |
