Method Article

שיטה ליצירת מדיום מותנה אוליגודנדרוציטים

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Mazuir, E., et al. דור של אוליגודנדרוציטים ומדיום מותנה אוליגודנדרוציטים לניסויים בתרבית משותפת. J. Vis. Exp. (2020)

סרטון זה מדגים את הייצור של תווך מותנה אוליגודנדרוציטים (OCM) מתאי שושלת אוליגודנדרוציטים על ידי הדגשה שלהם כדי להגביר את שחרורם המולקולרי למדיום. התווך הזה, שעשיר בגורמי גדילה, ציטוקינים ומולקולות ביו-אקטיביות אחרות, יכול להתווסף לתרביות נוירונים כדי לקבל תובנה לגבי ההשפעה של גורמים המופרשים על-ידי אוליגודנדרוציטים על הפיזיולוגיה והקישוריות העצבית.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. שושלת OL (OL) קצירת תאים ותרבית

הערה: יש לבצע שלבים אלה במכסה מנוע זרימה למינרית בתנאים סטריליים.

  1. ביום שלאחר הרעידה, הכינו את מדיום Bottenstein-Sato (BS) לפי טבלה 1.
  2. שוטפים צלחות פטרי מצופות 3 פעמים במים מזוקקים סטריליים.
  3. קצרו צלוחיות סופרנאטנט המכילות בעיקר תאי שושלת OL אך גם כמה תאי מיקרוגליאה והניחו אותו על צלחות פטרי 100 מ"מ לא מצופות.
    הערה: שלב זה מאפשר הסרה של תאי מיקרוגליאה באמצעות הידבקות מהירה דיפרנציאלית על פני המנה.
  4. דגרו על צלחות הפטרי במשך 15 דקות באינקובטור לח בטמפרטורה של 37°C מתחת ל-5% CO

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
תוסף B27תרמופישר17504044
D-(+)-תמיסת גלוקוזסיגמאG8769
מדיום הנשר המותאם של דולבקותרמופישר31966021
אתנול 100%סיגמא32221-M
אתנול 70%VWR כימיקלים83801.36
סרום עגל עוברתרמופישר10082147
נוירובזלתרמופישר21103049
פניצילין-סטרפטומיציןתרמופישר15140122
פוספט מלח חוצץ ללא סידן ומגנזיוםתרמופישרA1285601
פוליאתילנימין (PEI)סיגמאP3143
בוטנשטיין-סאטו (BS) מדיה
אפו-טרנספרין אנושיסיגמאT1147
BSA (אלבומין בסרום בקר)סיגמאA4161
מדיום הנשר המותאם של דולבקותרמופישר31966021
אינסוליןסיגמאI5500
PDGFפפרוטקAF-100-13A
פניצילין-סטרפטומיציןתרמופישר15140122
פרוגסטרוןסיגמאP8783
פוטרסין דיהידרוכלורידסיגמאP5780
נתרן סלניטסיגמאS5261
T3 (3,3',5-Triiodo-L-thyronine נתרן מלח)סיגמאT6397
T4 (ל-תירוקסין)סיגמאT1775
כלים
מסנן 0.22 מיקרומטרסרטוריוס514-7010
1 מזרק מ"לתרומו1611127
צלחת פטרי 100 מ"מדוטשר193100
צינור 15 מ"לקורנינג מדעי החיים734-1867
צינור 50 מ"לקורנינג מדעי החיים734-1869
צלחת פטרי 60 מ"מדוטשר67003

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Oligodendrocyte Conditioned MediumOligodendrocyte Lineage CellsCell Attachment EnhancementNutrient Poor Medium IncubationMedium Filtration SterilizationBioactive Molecule SecretionOCM Storage PreservationPolymer Coated Petri DishHumidified Incubator ConditionsLaminar Flow Hood Sterility

Related Articles