יצירת תאי אנדותל במוח מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים

תקציר

מקור: Endres, L. M., et al., Neisseria meningitidis זיהום של תאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים תאי אנדותל במוח. J. Vis. Exp. (2020)

סרטון זה מדגים פרוטוקול להשראת התמיינות תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים לתאי אנדותל במוח.

פרוטוקול

1. הכנת החומרים הדרושים לתרבות iPSC ובידול BEC.

1. ציפוי מטריצה של פלסטיק תרבית רקמה (TC) לתרבית IMR90-4 iPSC
   1. Aliquot מרתף ממברנה מטריקס ג'ל (למשל, Matrigel) לתוך 2.5 מ"ג aliquots ולאחסן ב -20 °C.
      הערה: עבוד במהירות בעת טיפול ג'ל מטריצה aliquot על קרח, כפי שהוא יוצר ג'ל מעל 4 ° C ולא ניתן aliquoted לאחר שהוא התמצק.
   2. לציפוי פלסטיק TC, הוסף במהירות aliquot אחד של ג'ל מטריצה ל- 30 מ"ל של מדיום הנשר השונה (DMEM) / F12 בינוני של Dulbecco בצינור חרוטי של 50 מ"ל. מוסיפים 1 מ"ל של המדיום על ג'ל המטריקס הקפוא, פיפטה למעלה ולמטה עד שהוא מופשר, ומעבירים מיד לצינור החרוטי 50 מ"ל עם המדיום הנותר.
   3. ....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Accutase (1x)	סיגמא	A6964
חומצה רטינואית All-trans (RA)	סיגמא	₪625
ב-מרקפטואתנול	מרק (סיגמא-אולדריץ')	805740
צלחות וצלוחיות תרבית תאים	זארשטדט
צנטריפוגה (Heraeus Megafuge 1.0R)	תרמו סיינטיפיק
ארון בטיחות ביולוגית Class II	נואיר	NU-437-400E
אינקובטור פחמן דו חמצני (DHD Autoflow Carbon Tדו חמצני Air-Jacketed Incubator)	נואיר
קולגן IV	סיגמא	C5533
מסנני פוליאסטר Costar Transwell (12 או 24 בארות)	קורנינג	3460, 3470
פיברונקטין	סיגמא	F1141
המקיטומטר (נויבאואר)	א. הרטנשטיין	ZK06
גורם גדילה פיברובלסט בסיסי אנושי (bFGF)	פפרוטק	100-18 ב'
סרום אנדותל אנושי ללא מדיום (hESFM)	גיבקו	11111-044
מיקרוסקופ הפוך (Wilovert)	הונד (וויל וצלר)
iPS(IMR90)-4 תאים	ויסל
תחליף סרום נוקאאוט (KOSR)	גיבקו	10828-028
ל-גלוטמין (GlutaMAX)	Invitrogen	35050-038
מטריג'ל מטריקס	קורנינג	354230
חומצות אמינו לא חיוניות (NEAA)	גיבקו	11140-035
StemFlex בסיסי בינוני + 50x תוסף StemFlex	גיבקו	A3349401	אמצעי תחזוקת תאי גזע
רוטור דלי מתנדנד (Heraeus #2704)	תרמו סיינטיפיק