הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
3K צפיות
⸱
8 ביולי 2025
מקור: de Luca, A. C., et al., Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration. J. Vis. Exp. (2015).
סרטון זה מדגים שיטה לקצירת תאי עצב מגרעיני השורש הגבי (DRG). DRG מעמוד השדרה של חולדה מבודד, מטופל באנזימים, ולאחר מכן מנותק מכנית כדי להשיג תרחיף חד-תאי. תאי העצב מופרדים מתאי גלייה באמצעות צנטריפוגה הדרגתית של צפיפות ומתורבתים במדיום גידול.
כל ההליכים הכרוכים באיסוף דגימות בוצעו בהתאם להנחיות IRB של המכון.
1. מערך ניסיוני
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מסננת תאים 100 מיקרומטר | BD Biosciences | 352360 | ניתן להשתמש במסננות 70 מיקרומטר (Ref. 352350) כחלופה |
| 15 מ"ל צינורות פלסטיק | זארשטדט | 62.554.002 | |
| 50 מ"ל צינורות פלסטיק | זארשטדט | 62.547.004 | |
| 75 ס"מ2 צלוחיות | קורנינג | BC301 | |
| אלבומין בסרום בקר (BSA) | סיגמא | A9205 | |
| Collagenase סוג IV | וורת'ינגטון ביוכימיה | LS004188 | הערה: collagenase זה משמש רק כדי לנתק צמחי DRG |
| סרום בקר עוברי (FBS) | ביוסרה | FB-1001 | |
| פיפטות זכוכית | פישר סיינטיפיק | FB50253 | חומר חד שיש להשליך בהתאם |
| תערובת חומרים מזינים F12 HAM | סיגמא | N6658 | יש לחמם ב-37°C באמבט מים אלא אם צוין אחרת |
| תמיסת מלח מאוזנת של האנק (HBSS) | סיגמא | H9394 | יש לחמם ב-37°C באמבט מים אלא אם צוין אחרת |
| תוסף N-2 (100x) | Invitrogen | 17502 | |
| גורם גדילה עצבי 2.5s חלבון, בלוטות תת-מקסילריות של עכבר (NGF) | מיליפור | NC011 | |
| פניצילין-סטרפטומיצין (PS) | סיגמא | P0781 | |
| צלחות פטרי | קורנינג | 430165 | |
| טריפסין (2x לבלב בקר) | וורת'ינגטון ביוכימיה | LS003703 | זה משמש לדיסוציאציה DRG |
