טכניקה לאופטימיזציה של תרבית אורגנואידים מוחיים באמצעות הארה צידית של אור רך

תקציר

מקור: Chen, B. et al., להקל על תרבית אורגנואידים מוחית באמצעות תאורת אור רך רוחבית.J. Vis. Exp.(2022).

סרטון זה מציג את השימוש בטכניקת הארה צידית של אור רך כדי לשפר את ההדמיה בעין בלתי של גופים עובריים, ובכך להקל על מניפולציה והעברה שלהם במהלך תרבית אורגנואידים מוחיים. הוא מבהיר את ההתקנה של תאורת אור רך, שיטות לשינויי מדיה והעברת גוף עוברי, כמו גם את ההליך לגרימת התמיינות עצבית בגופי עובר להתפתחות אורגנואידים מוחיים.

פרוטוקול

כל ההליכים הכרוכים באיסוף דגימות בוצעו בהתאם להנחיות IRB של המכון.

1. הכנת מנורת האור הרך (יום 1)

1. השתמש בלוח אקרילי שקוף בעובי של 0.3-0.5 ס"מ בגודל נייר A5. הדביקו רפידות לבנות בחלק הקדמי והאחורי של לוח האקריליק.
2. התקינו שורה של נורות LED לבנות בקצה הצלחת כך שהנורות יוכלו להיכנס מהצד של הלוח האקרילי ואז לירות החוצה במקביל (איור 1A-F, איור 2B).
   הערה: מכיוון שהקטרים של EBs בשלב המוקדם הם בערך 200 מיקרומטר עד 300 מיקרומטר, קשה לצפות בהם בבירור בעין בלתי מתחת למנורת פלורסנט של ספסלים נקיים. לעומת זאת, הודות לשיפור ההשתקפות המפוזרת, אנו יכולים לזהות את ה-EBs בבירור בא....

תוצאות

איור 1: הכנת מנורת האור הרך. (A) ספק הכוח ונורות ה-LED הותקנו בצד אחד של לוח האקריליק (כפי שמוצג בתיבה האדומה המנוקדת). אורך גל הפיזור של נורת LED רכה הוא 450-470 ננומטר, שטף האור הוא 1300-1800 לומן, ואינדקס עיבוד הצבע הוא 75-85 Ra. (B) נבדק אם נורות הלד יכולות להידלק כרגיל (כפי שמוצג בתיבה האדומה המנוקדת). (C) לוח לבן הודבק על החלק הקדמי והאחורי של .......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
0.2 מיקרומטר מסנן	NEST Biotechnology, סין	331001
1000 μL קצה פיפטה רחב	Thermo Fisher Scientific, ארה"ב	9405163
צלחת הדבקה נמוכה 6 בארות	NEST Biotechnology, סין	703011	הוא משמש לתרביות השעיה EBs
צנטריפוגה	Eppendorf, גרמניה	1850 ₪	זה יכול לשמש צנטריפוגה של סוגים שונים של צינורות צנטריפוגה, בקבוקי מגיב וצלחות עבודה.
DMEM-F12	Thermo Fisher Scientific, ארה"ב	11330032
הפארין	Merck, גרמניה	H3149
תוסף גלוטמקס	Thermo Fisher Scientific, ארה"ב	35050061
תוסף גלוטמקס	Thermo Fisher Scientific, ארה"ב	17504044
מם-נאה	Thermo Fisher Scientific, ארה"ב	11140050
תוספת N2	Thermo Fisher Scientific, ארה"ב	17502048
מנורת אור רכה	אגוז	אגוז	מכשיר פשוט מתוצרת עצמית, עיין באיור משלים 2 להכנה.