השגת תרבית תאי גליה מעורבת ממוח עכבר יילוד

תקציר

מקור: Sarkar, S. et al., בידוד מגנטי CD11b מהיר ומעודן של מיקרוגליה ראשונית עם טוהר ורבגוניות משופרים. J. Vis. Exp. (2017)

הסרטון הדגים את השיטה של בידוד וטיפוח תאים ממוחו של עכבר בילוד. היא כללה דיסוציאציה אנזימטית ומכנית של המוח, ואחריה תרבית במצע גדילה חסר גורם גדילה עצבי כדי להשיג אוכלוסיית גלייה מעורבת.

פרוטוקול

כל ההליכים הנוגעים לדגימות בעלי חיים נבדקו ואושרו על ידי הוועדה המתאימה לבדיקה אתית של בעלי חיים.

1. גידול תרבויות גליה מעורבות

1. ערפו את ראשיהם של גורים בני יום עד יומיים במהירות עם מספריים פעילים בגודל 5.5 אינץ' והניחו את הראשים מיד בצינור של 50 מ"ל על קרח. שים לב כי עריפת ראש זו היא מצב של המתת חסד.
2. במכסה מנוע זרימת אוויר למינרי, בצע חתך קטן בגולגולת ובקרומי המוח באמצעות מספריים ישרים בגודל 4.5 אינץ 'לניתוח מיקרו. מתחילים לחתוך מהקצה הקאודלי לקצה הרוסטרלי (האף). היכנס מתחת לעור באמצעות הפתח שנוצר על ידי עריפת הראש.
   1. לאחר החתך, מקלפים את אחת ההמיספרות הצידה. לאחר מכן השתמשו בזוג פינצטות מע....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
DMEM/F12 (1:1) (1x)	לייף טכנולוגיות	11330057
נתרן פירובט	לייף טכנולוגיות	11360070
MEM חומצות אמינו לא חיוניות (100x)	לייף טכנולוגיות	11140050
ל-גלוטמין (100x)	לייף טכנולוגיות	25030081
EDTA	פישר סיינטיפיק	AM9260G
סרום בקר עוברי	סיגמא	13H469
0.25% טריפסין-EDTA	Gibco מבית Life Technologies	25200