יצירת פרוסות קליפת החגורה התלמוס-קדמית האמצעית ממוחות עכברים

תקציר

מקור: Lu, H., et al. גירוי זרם ישר ורישום מערך רב אלקטרודות של פעילות דמוית התקף בהכנת פרוסות מוח של עכברים. J. Vis. Exp. (2016)

הסרטון מדגים את הכנת פרוסות פיתול החגורה התלמוס-קדמי המדיאלי (MT-ACC) ממוחות עכברים. מוחו של עכבר מנותח, חתכים נעשים כדי לחשוף את מסלול MT-ACC, ופרוסות נוצרות באמצעות ויברטום. פרוסות MT-ACC נשמרות לאחר מכן בנוזל מוחי מלאכותי מחומצן.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הכנת פרוסת המוח

1. יש להשתמש בעכברי C57BL/6J זכרים, בני 4-8 שבועות. שכן את בעלי החיים בחדר ממוזג (21-23 מעלות צלזיוס; 50% לחות; 12 שעות / 12 שעות מחזור אור/חושך, אורות דולקים בשעה 08:00) עם גישה חופשית למזון ומים.
2. קח aliquot 250 מ"ל של נוזל המוח השדרה מלאכותי (aCSF) ומניחים אותו בתוך המכילה קרח. במקביל, לספק גז רציף המורכב 95% O₂ ו 5% CO₂.
3. כירורגיה
   1. מרדימים את בעל החיים עם 4% איזופלורן בקופסת זכוכית למשך כ-3 דקות. ברגע שהחיה מגיעה לעומק כירורגי של הרדמה (המסומן על ידי חוסר תגובה לצביטת בוהן), הניחו אותה על מגש רדוד מלא בקרח כתוש, והסירו את הראש באמצעות מספריים.
   2. חושפים את הגולגולת, וחותכים את השריר שנותר. לאחר מכן, באמצעות rongeurs, לקלף את פני השטח הגבי של הגולגולת מן המוח. חותכים את צידי הגולגולת באמצעות רונגורים. לעקר את כל כלי הניתוח בתמיסת אתנול 75%.
   3. באמצעות מרית, לחתוך את פקעות הריח ואת הקשרים העצביים לאורך פני השטח הגחוני של המוח, ולהסיר את המוח. לאחר עריפת ראש, העבירו במהירות את המוח לכוס מלאה ב-aCSF מחומצן קר כקרח.
4. הכנת קליפת המוח התלמוס המדיאלי (MT)-פיתול החגורה הקדמי (ACC) פרוסת מוח
   הערה: הכינו פרוסות המכילות את המסלול מה- MT ל- ACC.
   1. חתכו ביד את גוש המוח עם שני חתכים סגיטליים 2.0 מ"מ לרוחב לקו האמצע בכל חצי כדור כדי להציג את האנטומיה התת-קליפתית. לאחר מכן בצע שני חתכים זוויתיים. בצע את החתך הצולב, הראשון במקביל למערכת הסיבים הנראית לעין בסטריאטום.
   2. בצע את החתך הצולב, השני, מהחיבור בין המוח הקטן לקליפת המוח הראייה, לנקודת האמצע בין הקומיסורה הקדמית לבין מערכת הראייה, שהן גחון ומקבילות למסלול התלמוסינגולט.
   3. חבר את בלוק המוח לצלחת זוויתית (~ 120 °) עם דבק ציאנואקרילט ובצע חתך ממש מעל נקודת המפנה של המסלול. פתחו את הצלחת, שטחו אותה והדביקו אותה על במת התא של הוויברטום.
   4. הכינו פרוסות מוח תלמוס-ACC מדיאליות (בעובי 500 מיקרומטר) ולאחר מכן טבלו אותן ב-aCSF מחומצן קר כקרח. העבירו את הפרוסות לתא ההקלטה ושמרו בטמפרטורה של 32°C תחת זילוח רציף (12 מ"ל/דקה) עם aCSF מחומצן למשך שעה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
הרדמה:
איזופלורן	תאגיד מוצרי Halocarbon	NDC 12164-002-25	4%
aCSF (סה"כ:1L):
D(+)-גלוקוז	מרק	1.08337.1000	10 מ"מ
נתרן מימן פחמתי	מרק	1.06329.0500	25 מ"מ
נתרן כלורי	מרק	1.06404.1000	124 מ"מ
(+)-נתרן L-אסקורבט, >=98%	סיגמא	A4034-100G	0.15 גרם / 2 צלזיוס
מגנזיום גופרתי, נטול מים, ReagentPlus	סיגמא	M7506-500G	2 מ"מ
סידן כלורי דיהידראט	מרק	1.02382.1000	2 מ"מ
נתרן דימימן פוספט מונוהידראט	מרק	1.06346.1000	1 מ"מ
אשלגן כלורי	מאי & בייקר בע"מ דאגנהאם, אנגליה	MS 7616	4.4 מ"מ