בידוד נוירונים חושיים וטיפוח משותף עם תאי הרג טבעיים

תקציר

מקור:Ahmadi, A., et al. מתגרה ביחסי הגומלין בין תאי הרג טבעיים לנוירונים nociceptor. J. Vis. Exp. (2022).

סרטון זה מתאר את הבידוד של נוירוני DRG באמצעות עיכול אנזימטי, דיסוציאציה מכנית וצנטריפוגה הדרגתית. תאי DRG מתורבתים יחד עם תאי הרג טבעיים על מטריצה חוץ-תאית כדי לחקור את האינטראקציה בין תאי מערכת החיסון לבין נוירונים חושיים.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. בידוד תאי NK, תרבית וגירוי

1. צור נוירון nociceptor שלם (בקרת littermate; TRPV1wt::D TAfl/wt) ועכברי ablated (TRPV1cre::D TAfl/wt) על ידי חציית עכברי רעלן lox-stop-lox-diphtheria (DTAfl/fl) עם עכברי TRPV1cre/wt.
2. באמצעות שאיפת CO2, הרדימו עכבר נאיבי (TRPV1wt::D TAfl/wt).
3. יש לאסוף את הטחול בצינור מיקרוצנטריפוגה בנפח 1.5 מ"ל המכיל 500 מיקרוליטר של מלח סטרילי חוצץ פוספט (PBS).
4. הומוגניזציה של הטחול באמצעות מזיק.
5. לדלל את התאים עם 1 מ"ל של PBS סטרילי.<....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
B-27	מעבדת ג'קסון	מס' קטלוגי: 009669
דרגת תרבית אלבומין בסרום בקר (BSA)	מכשירים מדויקים בעולם	מס' קטלוגי: 504167
BV421 נגד עכבר NK-1.1	פישר סיינטיפיק	מס' קטלוגי: 12430112
מסננת תאים (50 מיקרומטר)	פישר סיינטיפיק	מס' קטלוגי: A3160702
קולגנאז IV	פישר סיינטיפיק	מס' קטלוגי: 15140148
דיספאס השני	פישר סיינטיפיק	מס' קטלוגי: 13-678-20B
מדיום הנשר המעובד של דולבקו (DMEM)	פישר סיינטיפיק	מס' קטלוגי: 07-200-95
ערכת בידוד תאי NK עכבר EasySep	סיגמא	מס' קטלוגי: CLS2595
חומצה אתילאנדיאמיןטטראצטית (EDTA)	סיגמא	מס' קטלוגי: C0130
סרום בקר עוברי (FBS)	סיגמא	מס' קטלוגי: 806552
פיפטה פסטר זכוכית	סיגמא	מס' קטלוגי: 470236-274
גורם נוירוטרופי הנגזר מקו תאי גליה (GDNF)	VWR	מס' קטלוגי: 02-0131
למינין	ארזלן	מס' קטלוגי: 03-50/31
ל-גלוטמין	גיבקו	מס' קטלוגי: A14867-01
עכבר רקומביננטי IL-15	גיבקו	מס' קטלוגי: 22400-089
עכבר רקומביננטי IL-2	גיבקו	מס' קטלוגי: 21103-049
גורם גדילה עצבי (NGF)	לייף טכנולוגיות	מס' קטלוגי: 13257-019
מדיה נוירובזאלית	פפרוטק	מס' קטלוגי: 450-51-10
פניצילין וסטרפטומיצין	פפרוטק	מס' קטלוגי: 210-15
פסטלס	טכנולוגיית תאי גזע	מס' קטלוגי: 19855
מלח חוצץ פוספט (PBS)	ביואגדה	מס' קטלוגי: 108732	שיבוט PK136
מדיה RPMI 1640	ביואגדה	מס' קטלוגי: 137606	שיבוט 29A1.4
פינצטה וכלי נתיחה.	ביואגדה	מס' קטלוגי: 65-0865-14
צלחת 96 בארות תחתונה בצורת U	ביואגדה	מס' קטלוגי: 101319
כדאיות צבע eFlour-780	בקטון דיקינסון
אינקובטור CO2
מיקרוסקופ דיסקציה