דיסקציה והרכבה של זחלי זבוב פירות צמחי מוח

תקציר

מקור: Sheng, C., et al. הדמיה חיה בהילוך מהיר וכימות של דינמיקה מהירה של ענף דנדריטי בפיתוח נוירונים דרוזופילים. J. Vis. Exp. (2019).

סרטון זה מדגים את הנתיחה וההרכבה של צמחי מוח מזחלי דרוזופילה. מערכת העצבים המרכזית (CNS), המחוברת לדיסקי עיניים, מופקת מהזחלים ולאחר מכן מורכבת על מגלשת זכוכית בתמיסת מלח פיזיולוגית.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. ניתוח והרכבה של צמחי מוח זחלים

1. נתח את מוחות הזחלים בתמיסת מלח חיצונית פיזיולוגית (120 mM NaCl, 4 mM MgCl₂, 3 mM KCl, 10 mM NaHCO₃, 10 mM גלוקוז, 10 mM סוכרוז, 5 mM N-[Tris(hydroxymethyl)methyl]-2-aminoethanesulfonic acid (TES), 10 mM 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid (HEPES), 2 mM Ca²⁺, pH 7.2) תחת מיקרוסקופ דיסקציה (4.5x הגדלה כוח) עם שני זוגות של #5 מלקחיים סטנדרטיים קצה (11 ס"מ). השתמש בזוג מלקחיים אחד כדי להחזיק את גוף הזחל במקו....

תוצאות

איור 1: זרימת עבודה של פרוטוקול הדמיה וכימות של דינמיקת דנדריטים. (A) הפרוטוקול מכיל שישה שלבים המכסים הכנת דגימה, איסוף תמונות, עיבוד תמונה וכימות אוטומטי למחצה של דינמיקת דנדריטים. (B) תרשים סכמטי המדגים תא הדמיה המכיל צמח מוח זחל המורכב עם הצד הגבי כלפי מעלה. לצמח המוח יש נוירון גחוני צדדי (LNv) המסומן בנפרד בכל אונה, והוא שקוע בתמיסת המלח החיצונית. מחסומי השומ.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
שומן ואקום גבוה	דאו קורנינג	79751-30
זכוכית כיסוי למיקרוסקופ	פישר סיינטיפיק	12-544-E
שקופיות מיקרוסקופ Superfrost Plus	פישר סיינטיפיק	12-550-15
ריאגנטים
גלוקוז
HEPES
KCl
MgCl2
NaCl
NaHCO3
PBS
סוכרוז
TES