$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
מדידה של פיזיולוגיה סינפטית חיה עם מערכי מולטיאלקטרודות (MEAs)
1. הכינו MEAs לתרבית תאים.
- נקו את פני השטח של כל MEA עם 1 מ"ל של חומר ניקוי למשך שעה אחת. יש לשטוף במים סטריליים שעברו דה-יוניזציה (DI), לשטוף באתנול 70% לעיקור ולאחר מכן לייבש באוויר בארון בטיחות ביולוגית תחת אור UV.
הערה: MEAs ניתן לאחסן במי DI ב 4 ° C בתנאים סטריליים עד השימוש.
- הכינו תמיסה של 0.5 מ"ג/מ"ל של פולי-אורניתין (אש"ף) על ידי המסת 50 מ"ג אש"ף לתוך 100 מ"ל של מאגר חומצה בורית. צפו את פני השטח של כל MEA ב-1 מ"ל אש"ף כדי להפוך אותו להידרופילי ולדגור ב-37°C למשך 4 שעות לפחות. הסר את אש"ף ושטוף את פני השטח במי DI.
- יש לדלל תמיסת ציפוי מטריצה חוץ-תאית (ECM) במדיה בזאלית (DMEM/F12) להכנת תמיסת מלאי של 1 מ"ג/מ"ל. לפתרון עבודה, השהה מחדש 3 מ"ל של מלאי ECM ל- 33 מ"ל של מדיה DMEM/F12 מקוררת מראש, והביא את הנפח הכולל ל- 36 מ"ל לריכוז של 80 מיקרוגרם / מ"ל.
- הוסף 1 מ"ל של פתרון עבודה ECM לכל MEA ודגור ב 37 ° C למשך 4 שעות לפחות.
- הסירו את ה-ECM ומקמו את הכדורים ב-1.5 מ"ל של מדיה על משטח MEA, כדי לוודא שהכדורים ממוקמים על גבי מערך האלקטרודות (איורים 1A, 1A'). אפשר לתקשורת לדבוק במשך יומיים. החליפו מחצית מהמדיה כל 2-3 ימים (או לעתים קרובות יותר במידת הצורך), וודאו שהכדורים אינם מופרעים.
הערה: הוספת גורמי גדילה עשויה לשפר את הישרדות התרבות והתבגרותה.
2. למדוד את הפעילות החשמלית של ספירות עצביות.
- הגדר מערכת מערך מרובה אלקטרודות (MEA) עם שלב ראש מבוקר טמפרטורה. צור תוכנה עם מסנן מעבר גבוה של 5 הרץ, מסנן מעבר נמוך של 200 הרץ וסף ספייק של סטיית תקן (SD) של 5x.
- הניחו את ה-MEA על הבמה ותיעדו פעילות חשמלית ספונטנית (איור 1B, B'). שמור נתונים גולמיים, כולל תדירות ספייק ומשרעת, לצורך ניתוח סטטיסטי.
הערה: ניתן להשתמש במערכת זילוח עם MEA כדי להוסיף חומרים פרמקולוגיים או להגביר את זרימת המדיה הטרייה להקלטה לטווח ארוך. כרצונך, ניתן לבצע עיבוד נוסף של קוצים.
