מאמר שיטה

מדידת פוטנציאלי פעולת שרירים מורכבים בשרירים קדמיים של עכבר in vivo

8 ביולי 2025

במאמר זה

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Pollari, E. et al., In Vivo מדידה אלקטרופיזיולוגית של פוטנציאל פעולת שרירים מורכבים מהגפיים במודלים עכבריים של ניוון נוירונים מוטוריים.J. Vis. Exp. (2018).

סרטון זה מדגים טכניקת in vivo למדידת פוטנציאל פעולת שרירים מורכבים (CMAP) בעכברים. הוא מתאר את השלבים להגדרת אלקטרודות, גירוי נוירונים בגפיים הקדמיות המעצבבים סיבי שריר, ורישום תגובות שרירים. הטכניקה מעריכה דמיאלינציה עצבית ואובדן נוירונים תפקודיים.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הכנת בעלי חיים והרדמה

  1. יש להשרות הרדמה בעכבר עם שאיפת איזופלורן/חמצן. יש להשתמש ב-4% איזופלורן להשראת ההרדמה וב-2-3% לתחזוקה בזרימת חמצן של 2.5 ליטר/דקה. התאימו את אחוז האיזופלורן לתחזוקת חומר ההרדמה בהתאם למצבו של העכבר, כלומר עכברים קטנים וחלשים זקוקים לפחות חומרי הרדמה. ודא הרדמה מספקת, למשל, על ידי הפעלת לחץ קל על כרית ההליכה של הגפיים האחוריות כדי לבדוק היעדר רפלקס גמילה מכאב.
  2. שלוט בטמפרטורת גוף העכבר באמצעות צלחת חימום תרמוסטטית ב 37 ° C כדי למנוע את הירידה בטמפרטורת הגוף במהלך ההרדמה.
  3. התאימו לעכבר את חרוט האף לתחזוקת חומר ההרדמה. ודא כי בעל החיים יש מספיק אספקת חמצן על ידי בדיקה כי חרוט האף אינו חוסם את דרכי הנשימה וכי החיה נושמת ביציבות.
  4. במהלך ההקלטה, לפקח אם העכבר מורדם מספיק על ידי התבוננות בקצב הנשימה (כ 1 הרץ בהרדמה) ואת היעדר רפלקס נסיגה על לחץ קל. הגדל את ריכוז isoflurane באופן ידני אם ההרדמה אינה עמוקה מספיק.
  5. לאחר המדידות, השאירו את העכבר להתאושש על צלחת החימום או בחום של מנורת אינפרא אדום עד שהוא חזר להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבת עצם החזה, למשך כ 2-5 דקות. אין להשאיר את העכבר ללא השגחה ובחברת עכברים אחרים עד שהוא התאושש לחלוטין מההרדמה.

2. מדידת CMAP בפורלימבס

  1. השתמש באלקטרודות מחט 27 G למדידות CMAP של הגפיים הקדמיות. ראו איור 1 למקומות מומלצים למיקום אלקטרודות.
  2. הניחו אלקטרודות על הגפיים הקדמיות באופן הבא.
    1. מקמו את העכבר על כרית החימום במצב שכיבה והשתמשו בסרט הדבקה כדי להאריך את שתי הגפיים הקדמיות בצידי הגוף (איור 1B).
    2. הניחו את האלקטרודות המעוררות (1 = אנודה ו-2 = קתודה) באופן תת-עורי משני צידי הגפה הקדמית כדי ליישר קו עם עצב המקלעת הברכיאלית. הרימו את העור כדי להחדיר את המחט בניצב דרך העור ודחפו כ-5 מ"מ מהמחט מתחת לעור מבלי לנקב את השרירים שמתחתיו.
    3. הניחו את אלקטרודת ההקלטה (3) תת עורית על גבי שריר הזרוע הברכי על ידי הרמת העור. הניחו את אלקטרודת הייחוס (4) על משטחי ההליכה בעומק 3 מ"מ ובזווית של 30 מעלות. מקם את אלקטרודת הקרקע (5) תת עורית בצד העכבר.
      הערה: אלקטרודות נמצאות בסמיכות זו לזו במערך זה. מנע מאלקטרודות לגעת זו בזו מכיוון שהדבר מעוות את ההקלטה.

3. איסוף נתונים

  1. התחל את הגירוי על ידי לחיצה על לחצן הגירוי החוזר ביחידת הבקר וסובב את ידית בקר העוצמה כדי להגביר את הגירוי. עורר את כל האקסונים באמצעות פעימה אחת לשנייה עם משך גירוי של 0.1 אלפיות השנייה. בחר את התדירות ומשך הזמן הנכונים מתוך תפריטים נפתחים בתוכנה.
  2. כדי להגיע לגירויים על-מקסימליים (5-20 mA; בתנאי דה-מיאלינציה של עד 60 mA), יש להפעיל גירויים מגבירים על ידי סיבוב ידית בקר העוצמה עד שהמשרעת של תגובת CMAP מפסיקה לגדול. משם, להגדיל עוד יותר את הגירוי ב -20% כדי להבטיח כי משרעת CMAP הגיע התגובה המקסימלית שלה. סיים את הגירוי על ידי לחיצה נוספת על לחצן הגירוי החוזר.
  3. השתמשו בכלי הסמן כדי לציין את הנקודות הבאות בהקלטה: התחלת הגירוי, התחלת התגובה, שיא חיובי מקסימלי ושיא שלילי מקסימלי (איור 2).
  4. קבעו את זמן ההשהיה (בטרשת נפוצה) כעיכוב מתחילת הגירוי ועד להתחלת התגובה (איור 2). הגדר את התחלת התגובה כנקודה המוקדמת ביותר שבה המשרעת מתחילה לגדול. השתמש בהשהיה כדי להעריך דה-מיאלינציה באקסונים.
  5. מדדו את המשרעת (mV) מהשיא השלילי המרבי לשיא החיובי המרבי (איור 2). השתמש בגודל המשרעת כדי להתאים את מספר האקסונים הפונקציונליים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
איור 1. מיקום האלקטרודות למדידות CMAP.מיקום האלקטרודות מוצג עבור הגפיים האחוריות (A) והקדמיות (B). האלקטרודות ממוספרות באופן הבא: 1: אנודה ו-2: אלקטרודות מעוררות קתודה, 3: אלקטרודת הקלטה פעילה, 4: אלקטרודת ייחוס, ו-5: אלקטרודת הארקה.

figure-results-2
...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אלקטרודת מחט תת-עורית Resuable, Pl/IrטכנומדTE/S61-434אורך המחט 13 מ"מ (0.51 אינץ') וקוטר 0.4 מ"מ (27 גרם)
מערכת אלקטרודיאגנוסטית Natusנאטוס נוירולוגיהUltraPro S100מכשיר EMG
סינרגיהנאטוס נוירולוגיהגירסה 20.1.0.100תוכנת EMG עבור UltraPro S100
בקר PhysitemRothacher-Medical GmbHTCAT-2LVכרית חימום
מד זרימה דיגיטלי של מערכת הרדמה בסיסית combi-vet עם אידוי TEC 3רוטאכר ושותף;קורות חיים 30-301-Dאיזופלורן וופורייזר ומד זרימה
איזו-וטרינר 1000 מ"ג/גרם Piramal בריאות בריטניה מוגבלתAP/סמים/220/96איזופלורן
עכברי SOD1-G93Aמעבדת ג'קסון#002726ALS tg ו- non-tg שולטים בהמלטות, רק נקבות
עכברי PrP-hFUS-WT3מעבדת ג'קסון#017916 ALS tg ו- non-tg שולטים בהמלטות, כל הקבוצות מאוזנות עבור זכרים ונקבות
עכברי C57BL/6Jaxמעבדת ג'קסון#000664עכברים שאינם tg עבור אקסוטומיה, זכר ונקבה
עכברי C61-PMP22קו העכבר נתרם בנדיבות על ידי פרופ' מ. סרדה (מכון מקס פלנק לרפואה ניסויית, גטינגן, גרמניה).CMT tg ו- non-tg שולטים בהמלטות, כל הקבוצות מאוזנות לזכרים ונקבות

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Compound Muscle Action PotentialIn Vivo

מאמרים קשורים