$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. השתלת אלקטרודות VEP
- להרדים את בעל החיים עם הזרקה intraperitoneal של קטמין (75 מ"ג / ק"ג) ו medetomidine (0.5 מ"ג / ק"ג).
הערה: לאחר השראת ההרדמה יש להתבונן ברפלקסי הגמילה (בדיקת צביטה, רפלקס קרנית ומישוש וכו') ובהיעדרם כאינדיקציה לתחילת ניתוח. יש לעקוב באופן רציף אחר בעלי חיים במהלך הניתוח ולתת תרופות הרדמה נוספות (10% ממינון הקטמין הראשוני לכל מדף) אם הרפלקסים קיימים. חולדות בוגרות (>12 שבועות) משמשות בניסויים.
- לגלח את העור של אזור הניתוח. הניחו את בעל החיים על כרית חימום (37°C) כדי לשמור על חום הגוף במהלך הניתוח. להכין את העור באמצעות יישום מקומי של פובידון-יוד. יש למרוח גריפה כירורגית. יש למרוח משחה אופתלמית מקומית למניעת יובש בקרנית בהרדמה כללית. לשמור על אספסיס באמצעות מכשירים סטריליים.
- בצע חתך עור אורכי בקו האמצע של עור הראש. נקה את רקמת החיבור כדי להשיג חשיפה טובה של הגולגולת.
- קדח בזהירות חורי בור קטנים באופן ידני באמצעות מקדח יד מיקרו 7 מ"מ מאחורי הברגמה ו 3 מ"מ לרוחב לקו האמצע.
- השתלת אלקטרודות בורג דרך הגולגולת לתוך קליפת המוח (אזור 17), חודרות לקליפת המוח לעומק של כ-0.5 מ"מ. השתילו אלקטרודת בורג ייחוס על קו האמצע 3 מ"מ רוסטרל לברגמה. מרחו צמנט דנטלי כדי לעטוף ולתקן את הברגים (לא תמיד נדרש).
- תפרו את עור הראש, תנו משחה אנטיביוטית על העור, ואפשרו לבעל החיים להתאושש מהרדמה על כרית חימום.
הערה: לחלופין, ניתן להשאיר אלקטרודות חשופות כך שאין צורך לפתוח מחדש את העור בכל הקלטה. מיד עם הפסקת הניתוח אך לפני התאוששות מההרדמה, יש לתת תרופה נוגדת דלקת לא סטרואידית (NSAID) (אם לא ניתנה לפני הניתוח) או משכך כאבים אופיואידי. לפקח על בעלי החיים כל הזמן עד שהם מתאוששים לחלוטין מן ההרדמה והם אמבולטוריים.
- יש להמתין לפחות שבוע אחד עבור בעלי החיים להתאושש מהניתוח לפני רישום VEP.
2. הקלטת VEP
- להרדים את החיה ולהכין את העור כמו 1.1 ו 1.2.
הערה: ניתן להשתמש במינון נמוך יותר של חומרי הרדמה לרישום אלקטרופיזיולוגי (קטמין 40 מ"ג/ק"ג ומדטומידין 0.25 מ"ג/ק"ג).
- הניחו את החולדה בחדר חשוך ואפשרו לה להסתגל לחושך למשך 5-30 דקות. במקרים מסוימים, חולדות יכולות להיות O/N מותאמות כהה עבור סקוטופיות או אור מותאם עבור הקלטות VEP פוטופיק.
- שמור על טמפרטורת הגוף ב 37 ± 0.5 °C (75 °F) על ידי מערכת שמיכה הומואותרמית עם בדיקה מדחום רקטלי.
- להרחיב את האישונים עם טיפות עיניים טרופיקמיד 1.0%. פתח את העור מעל הגולגולת כדי לגשת לאלקטרודות בורג באתרן שהונחו מראש.
- חבר את הבורג מעל קליפת המוח הראייתית הנגדית של העין המגורה ואת בורג הייחוס למגבר. הכנס אלקטרודת מחט לתוך הזנב כמו הקרקע. מדדו ותחזקו את עכבת האלקטרודות מתחת ל-5kΩ.
- יש להניח מיני ממריץ גנצפלד ישירות על העור סביב העפעפיים כדי לספק בידוד עיניים מעולה. התאורה של הממריץ צריכה להיות מכויילת מראש על ידי פוטומטר.
- ספק גירוי פוטי באמצעות הבזקי אור 100 פעמים בתדר של 1 הרץ, עם הגדרות מסנן פס נמוך וגבוה של 1 ו- 100 הרץ, בהתאמה. קצב דגימת האות הוא 5 kHz.
הערה: יש לדגום אותות לפחות בסביבות 250 - 300 הרץ כדי להבטיח שיותר משתי דגימות נאספות במהלך כל מחזור.
- תפרו את העור בחזרה והחזיקו את בעלי החיים על כרית חימום כדי להתאושש מההרדמה. הקלטה יכולה להיות מוקלטת שוב ושוב על בעלי חיים בודדים כדי לפקח על שינויים תפקודיים לאורך תקופה של זמן.