רישום פוטנציאל שדה מקומי בפרוסות קליפת המוח של ההיפוקמפוס-אנטורינלי של עכבר

תקציר

מקור: Whitebirch, A. C. Acute Mouse Brain Slicing to Investigate Spontaneous Hippocampal Network Activity. J. Vis. Exp. (2020)

הסרטון מדגים הליך לרישום פוטנציאל השדה המקומי (LFP) בפרוסות קליפת המוח של ההיפוקמפוס-אנטורינלי של עכבר. גירוי חשמלי מסופק ברדיאטום שכבה CA3 של ההיפוקמפוס, אשר גורם לשינויים בפוטנציאל הפוסט-סינפטי בפירמידלה של שכבת CA1. השינוי המשולב בפוטנציאל הממברנה של נוירוני CA1, המכונה פוטנציאל השדה המקומי, נרשם.

פרוטוקול

כל ההליכים הכרוכים באיסוף דגימות בוצעו בהתאם להנחיות IRB של המכון.

1. זילוח קרום הלב

1. השהה מזרק בקיבולת 60 מ"ל כמאגר לתמיסת חיתוך סוכרוז כ -18 אינץ 'מעל הספסל (למשל, באמצעות מהדק מסתובב תלת ראשי על עמוד אנכי). חברו את הצינור לתחתית המאגר, העבירו את הצינור דרך מהדק גלילים וחברו את הקצה השני של הצינור למחט נקייה של 20 גרם.
2. מלאו את מאגר 60 מ"ל בתמיסת סוכרוז מקוררת בכ-30 מ"ל וכוונו קו קרבוגן לתוך מאגר הסוכרוז כדי לבעבע ללא הרף את הפרבוסט.
   הערה: ודא כי הסוכרוז זורם דרך הצינור והמחט ללא בועות לכודות. קצב הזרימה צריך להיות מהיר מספיק כדי שיהיה זרם יציב ומתמשך של סוכרוז נוטף מהמחט.
3. בעזרת בלנדר, מרסקים ומערבבים את הסוכרוז הקפוא לתרחיף קפוא ומשתמשים במרית/כף הגדולה כדי לפזר את הבוצה.
   1. מניחים כמות קטנה של סוכרוז סביב שולי מכסה צלחת פטרי זכוכית. הוסיפו כמות קטנה של סוכרוז לתחתית צלחת הפטרי.
   2. מוסיפים בערך 20-30 מ"ל של תמיסת סוכרוז למאגר נוזל הזילוח, מערבבים אותו היטב עם 30 מ"ל של סוכרוז נוזלי צונן עד שהמאגר מכיל תערובת של סוכרוז קר מאוד, בעיקר נוזלי עם קצת שאריות תמיסה קפואה.
4. הכניסו את העכבר לתא המחובר למכשיר אידוי איזופלורן. כאשר החמצן זורם במהירות של כ-2 ליטר/דקה, סובב את חוגת הוופורייזר כדי לספק איזופלורן בריכוז של 5% והפעל טיימר.
   הערה: החזיקו טיימר זה פועל לאורך כל תקופת החיתוך כדי לאמוד את מהירות קבלת הפרוסות. ההליך צריך להיעשות מהר ככל האפשר, כך שהחיתוך הושלם, והרקמה מתאוששת בתא הממשק תוך 15-20 דקות מכניסת בעל החיים לתא האיזופלורן. צפה בעכבר כדי להבטיח מצב של הרדמה עמוקה. לאחר מינימום של 5 דקות, העכבר צריך להיות מורדם עמוק ולא להגיב צביטות בהונות.
5. מיד לפני הוצאת העכבר מתא האיזופלורן, ממלאים את מכסה צלחת הפטרי בתמיסת סוכרוז צוננת לעומק של כ-3-5 מ"מ וממלאים את תחתית צלחת הפטרי בתמיסת סוכרוז צוננת לעומק של כ-1.0 ס"מ.
6. העבר במהירות את העכבר לכרית הסופגת השמאלית והשתמש ב-3 פיסות הסרט כדי לאבטח את הגפיים הקדמיות והזנב. בצע צביטה בבוהן הגפה האחורית כדי לוודא שהעכבר אינו מגיב לפני ביצוע חתך כלשהו. בעזרת המלקחיים הגדולים והמספריים הכירורגיים, מלקקים את העור ומבצעים חתך ארוך מתחתית עצם החזה ועד לחלק העליון של החזה. בעזרת המלקחיים מושכים למעלה על עצם החזה ובעזרת המספריים חותכים דרך הסרעפת.
   הערה: המיקום הראשוני של העכבר ומספר חתכים ראשונים לניתוק הסרעפת צריכים להתבצע במהירות האפשרית כדי להבטיח שהעכבר לא יחזור להכרה. כדי להבטיח עומק מספיק של הרדמה לאורך כל ההליך, חרוט האף יכול להיות ממוקם על העכבר כדי לספק isoflurane במהלך זילוח.
7. השתמש במספריים כדי לחתוך דרך כלוב הצלעות בכל צד, לחתוך בתנועה אחת גדולה לקראת הנקודה שבה הגפה הקדמית פוגשת את הגוף. בעזרת המלקחיים, הניפו את החלק הקדמי של כלוב הצלעות הצידה ומעלה לכיוון הראש, ולאחר מכן הסירו אותו במלואו בחיתוך אופקי באמצעות מספריים גדולים. החזיקו את הלב במקומו באמצעות המלקחיים הגדולים והכניסו את מחט הזילוח 20 G לחדר השמאלי. לאחר המחט ממוקם כראוי, הצד השמאלי של הלב צריך להחוויר במהירות כמו פתרון סוכרוז צונן ממלא את החדר.
8. השתמש מספריים דיסקטור קטן לחתוך לתוך אטריום ימין ולאפשר את הדם לזרום מתוך מערכת הדם. אם החתכים מבוצעים כראוי, אמור להיות נזק מינימלי ללב, והוא צריך להמשיך לשאוב לאורך כל הזילוח.
   הערה: ניתן להשתמש בחתיכות נייר טישו מגולגלות כדי לנדף דם ותמיסת סוכרוז מהלב ולשמור על נראות של מחט הזילוח במהלך ההליך.
9. ודא שמחט הזילוח נשארת במקומה ולא נופלת מהחדר השמאלי. עם קצב זרימה ומיקום נכונים, הכבד יתחיל להחוויר לצבע שזוף/בז' בהיר עם 20-30 שניות.
10. לאחר 30-45 שניות, השתמש במספריים הגדולים כדי לערוף את ראשו של העכבר. מחזיק את הראש ביד שמאל, לדחוף או לקלף את העור מן הגולגולת. בחיה מחוררת היטב, הגולגולת צריכה להיות חיוורת מאוד, והמוח צריך להופיע בצבע ורוד בהיר מאוד (מתקרב ללבן) דרך הגולגולת ללא כלי דם גלויים בבירור.

2. לחלץ את המוח לחתוך פרוסות

1. בעזרת מספריים קטנים של בון מבצעים שני חתכים רוחביים דרך הגולגולת לכיוון קו האמצע בקדמת הגולגולת, ליד העיניים. בצע שני חתכים נוספים משני צדי בסיס הגולגולת.
2. מעבירים את הראש לתחתית צלחת פטרי הזכוכית, שם יש לטבול אותו בעיקר בתמיסת סוכרוז צוננת. השתמשו במספריים הקטנים של בון כדי לחתוך את קו האמצע לאורך הגולגולת, ומשכו למעלה עם המספריים כדי למזער את הנזק לרקמת המוח שמתחתיה. בעזרת המלקחיים הקטנים, אחזו היטב בכל צד של הגולגולת והניפו אותו למעלה והרחק מהמוח, כמו לפתוח ספר.
3. השתמש באצבעות יד שמאל כדי להחזיק את דשי הגולגולת פתוחים ולהכניס את microspatula מתחת למוח ליד נורות הריח. הפכו את המוח מהגולגולת לתוך הסוכרוז והשתמשו במיקרו-מרית כדי לקטוע את גזע המוח. שטפו את המוח כדי להסיר שאריות דם, פרווה או רקמות אחרות.
4. השתמשו במרית/כף הגדולה כדי להעביר את המוח למכסה צלחת הפטרי מזכוכית. כאשר החצי השני של סכין הגילוח הדו-פיפיות מונח קודם לכן בצד, בצעו שני חתכים קורונליים כדי להסיר תחילה את המוח הקטן ולאחר מכן את החלק הקדמי ביותר של המוח, כולל נורות הריח (איור 1).
5. יש למרוח דבק ציאנואקרילט על כבש האגר. הניחו את המוח בקצרה על פיסת נייר סינון יבש באמצעות מלקחיים של רקמות גדולות ואז העבירו אותו מיד לרמפת האגר, תוך הנחת משטח הגחון של המוח על הדבק.
   הערה: עבור פרוסות של ההיפוקמפוס הבינוני, המוח צריך להיות מכוון כאשר החלק הקדמי פונה במעלה שיפוע הרמפה, והאחורי קרוב יותר ללהב. עבור פרוסות של ההיפוקמפוס הגחוני, כוונו את המוח כאשר הקצה הקדמי מכוון במורד שיפוע הרמפה, כאשר הקצה האחורי בחלק העליון של הרמפה, רחוק יותר מהלהב. בכל מקרה, המוח צריך להיות ממוקם בחלק העליון של הרמפה, כך שהמשטח החתוך קורונלית של המוח יוצר קשר עם גוש הגב של אגר (איור 1).
6. מניחים את משטח החיתוך עם האגר והמוח לתוך תא החיתוך של המיקרוטום וטובלים לחלוטין בתמיסת סוכרוז צוננת. השתמשו במרית/כף הגדולה כדי להעביר מעט סוכרוז לחדר, תוך ערבוב כדי להמיס כל סוכרוז קפוא ולהוריד במהירות את טמפרטורת התערובת ל~1-2 מעלות צלזיוס.
   הערה: צפו במד הטמפרטורה לאורך כל החיתוך. אם תמיסת הסוכרוז מתחממת מעל 3 מעלות צלזיוס, הוסיפו עוד תרחיף וערבבו כדי להוריד את הטמפרטורה בחזרה.
7. חתכו פרוסות בעובי של 450 מיקרומטר כאשר מהירות המיקרוטום מוגדרת ל-0.07 מ"מ לשנייה. כאשר כל פרוסה משתחררת, השתמשו במלקחיים של הרקמה הקטנה ובאזמל חד כדי להפריד תחילה בין שתי ההמיספרות, ולאחר מכן לחתוך את הרקמה עד שהפרוסה מורכבת בעיקר מאזורי ההיפוקמפוס והפארא-היפוקמפוס (איור 1).
8. השתמשו בפיפטת העברה מפלסטיק כדי להעביר את הפרוסות בנפרד לתא שחזור הממשק, וודאו שהן ממוקמות בממשק של ACSF והאוויר כאשר רק מניסקוס דק של נוזל מוחי מלאכותי (ACSF) מכסה את הפרוסות. סגרו היטב את מכסה התא ואפשרו לפרוסות להתאושש בטמפרטורה של 32°C למשך 30 דקות.
9. לאחר ההתאוששות הראשונית בטמפרטורה של 32°C, הוציאו את תא השחזור של הממשק מאמבט המים והניחו אותו על מערבל למהירות איטית כך שמוט הבחישה המגנטי יקדם את זרימת ACSF בתוך התא. תנו לו להתקרר בהדרגה לטמפרטורת החדר כשהפרוסות יתאוששו למשך 90 דקות נוספות. ודא שתא ההתאוששות מבעבע ללא הרף בקרבוגן ואל תאפשר לבועות גדולות להילכד מתחת לפרוסות.

3. ביצוע הקלטות פוטנציאל שדה מקומי (LFP) של פעילות ספונטנית

1. התכונן להקלטות LFP על ידי הפעלת כל הציוד הדרוש, כולל המחשב המריץ את תוכנת הרכישה, הצג המחובר למחשב, הממריצים, המיקרומניפולטור, בקר הטמפרטורה, מקור האור במיקרוסקופ, המצלמה המחוברת למיקרוסקופ, מגבר המיקרואלקטרודות, הדיגיטציה והמשאבה הפריסטלטית. אם אתם משתמשים במערכת ואקום מרכזית, פתחו את שסתום הקיר כדי להכין את קו הוואקום שיסיר את ACSF מתא ההקלטה.
2. מלאו את המכל המחומם ב-ACSF, ואז הכניסו קצה אחד של הצינור לתוך 400 מ"ל המכילה את ה-ACSF המבעבע. הפעל את המשאבה הפריסטלטית כדי לכוון את ACSF מהכוס של 400 מ"ל למאגר המחומם, ומהמאגר הלאה לתא ההקלטה. הקש או צבוט את הצינור כדי לשחרר בועות לכודות.
3. כוונן את המשאבה הפריסטלטית כדי להבטיח שקצב זרימת ACSF דרך תא ההקלטה יהיה מהיר (~ 8-10 מ"ל/דקה). השתמש בבדיקת טמפרטורה כדי להבטיח שה- ACSF הוא 32 ° C במרכז תא ההקלטה.
   הערה: אם ACSF מועבר לתא ההקלטה באמצעות משאבה פריסטלטית, קצב זרימה גבוה יכול לגרום לתנודה משמעותית בקצב הזרימה. ניתן להשיג קצבי זרימה עקביים באמצעות משכך פעימות פשוט המורכב מסדרה של מזרקים ריקים המשולבים בצנרת (איור 2).
4. הכינו פיפטות גירוי והקלטה מנימי זכוכית בורוסיליקט באמצעות מושך חוטים מחומם. פרוטוקול המושך צריך להיות מוגדר כך שיניב פיפטות עם התנגדות של 2-3 MOhm לגירוי או אלקטרודות הקלטה פוטנציאליות בשדה מקומי.
5. מלא פיפטות גירוי עם 1 M NaCl ו פיפטות LFP עם ACSF.
6. מהדק לזמן קצר את הצינור וכבה את המשאבה כדי להשהות את זרימת ACSF. העבירו פרוסה לתא ההקלטה בעזרת מלקחיים עדינים כדי לתפוס פינה של נייר העדשה שעליה מונחת הפרוסה - הפרוסה תידבק לנייר העדשה. מניחים את נייר העדשה ופורסים לתוך תא ההקלטה כאשר הפרוסה פונה כלפי מטה, ולאחר מכן "מקלפים" את נייר העדשה ומשאירים את הפרוסה שקועה בתא ההקלטה. מהדקים את הפרוסה בעזרת נבל.
   הערה: ניתן לרכוש נבלים מוכנים מראש או מיוצרים במעבדה באמצעות חתיכה בצורת U של נירוסטה או פלטינה וניילון דק.
7. מניחים פיפטת גירוי מלאה NaCl במיקרומניפולטור הידני ומקדמים באיטיות את קצה הפיפטה אל פני השטח של הפרוסה (למשל, בשכבת הרדיאטום) בזווית של כ-30-45 מעלות. ברגע שקצה הפיפטה נכנס לרקמה, מקדמים את הפיפטה קדימה באיטיות ונמנעים מתנועות גדולות בכיוון הצידי או האנכי שעלולות לפגוע שלא לצורך באקסונים בתוך הפרוסה. מניחים את קצה פיפטה לפחות 50-100 מיקרומטר עמוק לתוך הפרוסה כדי למנוע תאים ליד פני השטח שניזוקו במהלך החיתוך.
8. הניחו פיפטת LFP מלאה ACSF במחזיק פיפטה המחובר למיקרומניפולטור הממונע. יש להפעיל לחץ חיובי קל מאוד באמצעות לחץ פה או מזרק 1 מ"ל המחובר באמצעות שסתום סטופקוק ואורך קצר של צינור למחזיק הפיפטה.
   הערה: מקם פיפטות LFP בתוך הפרוסה על מנת להקליט את אותות העניין: במקרה של אדוות גל חדות, פיפטה אחת של LFP צריכה להיות ממוקמת בשכבה פירמידלה (SP) ופיפטה שנייה בשכבה רדיאטום (SR). תצורה זו מאפשרת הקלטות סימולטניות של הגל החד השלילי ב-SR ושל תנודת האדווה בתדר גבוה ב-SP (איור 3).
9. באמצעות המיקרומניפולטור, מקדמים באיטיות את קצה פיפטת ה-LFP לאזור העניין (למשל, שכבת התא הפירמידלי CA1) בזווית של כ-30-45 מעלות. מניחים את קצה פיפטה לפחות 50-100 מיקרומטר עמוק לתוך הפרוסה כדי למנוע תאים ליד פני השטח שניזוקו במהלך החיתוך. תוך כדי קידום פיפטת LFP, ספק ללא הרף פולס בדיקת מתח קטן באמצעות תוכנת הרכישה וצפה לעלייה פתאומית בהתנגדות האלקטרודות. זה עשוי להצביע על כך שהפיפטה נסתמה או נלחצה כנגד תא.
10. ברגע פיפטת LFP ממוקם באזור העניין, בזהירות לשחרר את הלחץ החיובי על ידי פתיחת השסתום על הצינור מחובר מחזיק פיפטה.
11. כדי להקליט את ה- LFP במיקום שני בו זמנית, חזור על שלבים 6.8-6.10 עם פיפטה שנייה ומיקרומניפולטור.
12. השתמש במגבר המיקרואלקטרודות בתצורת המהדק הנוכחית כדי לרשום פעילות ספונטנית בפוטנציאל השדה המקומי לאחר שימוש בפונקציית איזון הגשר בתוכנת הרכישה כדי לתקן התנגדות סדרתית של הפיפטה. אדוות ספונטניות של גלים חדים (SWR) יופיעו כסטיות חיוביות בפוטנציאל החוץ-תאי של שכבת SP (איור 3).
13. על מנת להקליט פוטנציאלי שדה מעוררים, השתמש בממריצים המחוברים לדיגיטציה כדי לספק פולס מתח מרובע קצר (200 us) דרך פיפטת הגירוי המלאה ב- NaCl. כוונן את חוגת מתח הגירוי כדי לעורר טווח של אמפליטודות תגובה.

תוצאות

איור 1: הכנת פרוסות קליפת המוח של ההיפוקמפוס-אנטורינל (HEC) בזווית אופקית. (א)(i) לאחר חילוץ המוח, בצע שני חתכים קורונליים עם סכין גילוח כדי להסיר את החלק האחורי והקדמי של המוח. (ii) כבש האגר בנוי משני חלקים זוויתיים המודבקים למשטח חיתוך המיקרוטום. כדי להכין פרוסות של ההיפוקמפוס הבינוני, הניחו את גוש המוח על כבש האגר כאשר המשטח הקדמי פונה במעלה המדרו...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מחזיק דגירה חריפה של פרוסת מוח	NIH 3D הדפסה Exchange	3DPX-001623	עוצב על ידי ChiaMing Lee, זמין בכתובת https://3dprint.nih.gov/discover/3dpx-001623
אדנוזין 5′-טריפוספט מלח מגנזיום	סיגמא אולדריץ'	A9187-500 מ"ג
כדורי קרקע Ag-Cl	וורנר	64-1309, (E205)
אגר	בקטון, דיקינסון	214530-500 גרם
חומצה אסקורבית	אלפא עזר	36237
(250 מ"ל)	קימקס	14000-250
(400 מ"ל)	קימקס	14000-400
ביוציטין	סיגמא אולדריץ'	B4261
בלנדר	אוסטר	BRLY07-B00-NP0
מספריים בון, קטנים	בקטון, דיקינסון	14184-09
נימי זכוכית בורוסיליקט עם חוט להט (קוטר חיצוני 1.5 מ"מ, ת.ז. 0.86 מ"מ, אורך 10 ס"מ)	סאטר אינסטרומנטס	BF150-86-10HP	נימים מלוטשים באש עדיפים.
תמיסת סידן כלורי (1 M)	G-Biosciences	₪200
מצלמה	אולימפוס	אולי-150
גז קרבוגן דחוס (95% חמצן / 5% פחמן דו חמצני)	איירגז	X02OX95C2003102
חמצן דחוס	איירגז	OX 200
ממריץ מבודד מתח קבוע	דיגיטימר בע"מ	DS2A-Mk.II
כיסויים (22x50 מ"מ)	VWR	16004-314
דבק ציאנואקרילט	דבק קרייזי	KG925	באופן אידיאלי, השתמש בצורת המברשת לקבלת דיוק
תוכנה לרכישת נתונים	אקסוגרף	לא ישים	כל תוכנה מקבילה (למשל pClamp) תעבוד.
תחנת עבודה שולחנית מדגם Precision T1500 Tower של Dell	Dell	לא ישים	מספר קטלוגי יהיה תלוי במחשב ספציפי - כל מחשב יעבוד כל עוד הוא יכול להפעיל תוכנת רכישת אלקטרופיזיולוגיה.
Digidata 1440A	התקנים מולקולריים	1-2950-0367
טיימר דיגיטלי	VWR	62344-641	טיימר 4 ערוצים ניתן למעקב
רפידות סופגות חד פעמיות	VWR	56616-018
מספריים דיסקטור	כלים מדעיים משובחים	14082-09
סכיני גילוח בעלי קצוות כפולים	פרסונה	BP9020
בקר טמפרטורה אוטומטי כפול	וורנר אינסטרומנט קורפוריישן	TC-344B
תא הקלטה ממוטב לזרימה כפולה או למינרית	לא ישים	לא ישים	החדר המוצג בפרוטוקול זה נעשה בהתאמה אישית. מקבילה מסחרית תהיה RC-27L של וורנר אינסטרומנטס.
ארון ציוד	אוטומציה מדעית	FR-EQ70"	ארון תקשורת אינו הכרחי אך שימושי לארגון אלקטרופיזיולוגיה
אתילן גליקול-ביס(2-aminoethyiether)- N,N,N',N'-חומצה טטראצטית (EGTA)	סיגמא אולדריץ'	324626-25GM
נייר סינון	מה איש	1004 070
קנה מידה עדין	מטלר טולדו	XS204DR
מושך מיקרופיפטה בוער/חום	סאטר אינסטרומנטס	P-97
צלחת פטרי זכוכית (100 x 15 מ"מ)	קורנינג	3160-101
גלוקוז	פישר סיינטיפיק	ד16-1
Guanosine 5′-triphosphate נתרן מלח hydrate	סיגמא אולדריץ'	G8877-250MG
דליי קרח	סיגמא אולדריץ'	BAM168072002-1EA
אידוי איזופלורן	שירותי הרדמה כללית	טק 3
קלטת מעבדה	פישר סיינטיפיק	15-901-10R
נייר עדשה	פישר סיינטיפיק	11-996
מקור אור	אולימפוס	ה4-100
תמיסת מגנזיום כלוריד (1 M)	איכות ביולוגית	351-033-721EA
חטיפי ערבוב מגנטיים	פישר סיינטיפיק	14-513-56	המספר הקטלוגי יהיה תלוי בגודל המוט
מיקרומניפולטור	Luigs &; Neumann	SM-5
מיקרומניפולטור (ידני)	סיינטיפיקה	LBM-2000-00
מיקרוסקופ	אולימפוס	BX51WI
מיקרוספטולה	כלים מדעיים משובחים	10089-11
צג	Dell	2007FPb
מגבר מיקרואלקטרודות MultiClamp 700B	התקנים מולקולריים	MULTICLAMP 700B	MultiClamp 700B צריך לכלול במות ראש, מחזיקי פיפטה ותא מודל.
N-(2-הידרוקסיאתיל)פיפרזין-N′-(2-חומצה אתאן-סולפונית), (HEPES)	סיגמא אולדריץ'	H3375-25G
מחט (20 מד, 1.5 אורך)	בקטון, דיקינסון	305176
ניילון נימה	YLI Wonder חוט בלתי נראה	212-15-004	גודל 0.004. החתול הזה. # הוא מ Amazon.com
רשת ניילון	וורנר אינסטרומנטס קורפוריישן	64-0198
משאבה פרסטלטית	מכשיר הרווארד	70-2027
מלח פוספוקריאטין די(טריס)	סיגמא אולדריץ'	P1937-1G
מחזיקי פיפטה	התקנים מולקולריים	1-HL-U
חוט פלטינה	דיוק עולמי	PT0203
נימה של חומצה פולילקטית (PLA)	אולטימייקר	RAL 9010
אשלגן כלורי	סיגמא אולדריץ'	P3911-500G
אשלגן גלוקונאט	סיגמא אולדריץ'	155,0001-200 מ"ג
אשלגן הידרוקסידי	סיגמא אולדריץ'	60377-1 ק"ג
סכיני גילוח	VWR	55411-050
מהדק רולר	מכשירים מדויקים בעולם	14041
סולם	מטלר טולדו	PM2000
ידית אזמל	כלים מדעיים משובחים	10004-13
פרוסת נבל	וורנר	SHD-26GH/2
סודיום ביקרבונט	פישר כימיקלים	S233-500
נתרן כלורי	סיגמא אולדריץ'	S9888-1KG
נתרן פוספט חד בסיסי נטול מים	פישר כימיקלים	S369-500
נתרן פירובט	פישר כימיקלים	BP356-100
מרית	VWR	82027-520
מרית/כף, גדולה	VWR	470149-442
להבי אזמל סטריליים	נוצה	72044-10
בוחש / פלטה חמה	קורנינג	6795-220
שסתומי סטופק, כיוון אחד	מכשירים מדויקים בעולם	14054
שסתומי סטופק, תלת-כיווני	מכשירים מדויקים בעולם	14036
סוכרוז	אקרוס אורגניקס	AC177142500
תמיכה במלחציים מסתובבים	פישר סיינטיפיק	14-679ש'
מספריים כירורגיים, חדים/קהים	כלים מדעיים משובחים	14001-12
מזרק (1 מ"ל)	בקטון, דיקינסון	309659
מזרק (60 מ"ל עם קצה Luer-Lok)	בקטון, דיקינסון	309653
מהדק תלת-ראשי	פישר סיינטיפיק	05-769-8Q
מלקחיים רקמות, גדולות	כלים מדעיים משובחים	11021-15
מלקחיים רקמתיים, קטנים	כלים מדעיים משובחים	11023-10
העברת פיפטות	פישר סיינטיפיק	13-711-7 מ'
אבובים	טייגון	E-3603	ID 1/16 אינץ', OD 3/16 אינץ'
אבובים	טייגון	R-3603	ID 1/8 אינץ', OD 1/4 אינץ'
שומן ואקום	דאו קורנינג	14-635-5D
מיקרוטום להב רוטט	לייקה	VT 1200S
שולחן לשיכוך רעידות עם כלוב פאראדיי	מיקרו-G / TMC-ametek	2536-516-4-30PE
בקבוק נפחי (1 ליטר)	קימקס	קים-28014-1000
בקבוק נפחי (2 ליטר)	פירקס	65640-2000
אמבט מים חמים	VWR	1209