$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. הכנת אלקטרודות וכבלים להקלטות EEG/EMG
- הכן אלקטרודת הקלטה EEG/EMG בהתאם לנוהל הבא.
הערה: האלקטרודה היא חד פעמית וניתן להשתמש בה רק עבור חיה אחת. תכנן בקפידה את תצורת החיווט עבור כל המחברים. מקם סימנים על המחברים עבור הכיוון הנכון.
- הלחמת כל סיכה של ראש 4 פינים לחוט נירוסטה בקוטר 2 ס"מ. בקיצור, הצמידו קצה אחד של החוט לסיכה, הניחו מגהץ הלחמה חם על מפרק סיכת התיל, והמיסו מעט הלחמה כדי להבטיח שמספיק הלחמה תעבור בצורה חלקה לתוך המפרק. היזהר לא להחיל יותר מדי חום על הסיכה; אחרת, הפלסטיק סביב הפינים יימס.
- הלחמת את הקצה החופשי של כל אחד משני החוטים המחוברים לראש הסיכה לראש בורג נירוסטה בקוטר 1.0 מ"מ. בקיצור, הצמידו את הקצה החופשי של החוט לחוט שמתחת לראש הבורג, הניחו מגהץ הלחמה חם על מפרק בורג החוט, והמיסו מעט הלחמה כדי להבטיח שהלחמה מספקת תעבור בצורה חלקה לתוך המפרק. 2 החוטים עם הברגים משמשים כאלקטרודות הקלטה EEG, ואילו 2 החוטים ללא ברגים משמשים כאלקטרודות רישום EMG.
- השתמש במספריים כדי להסיר 1 מ"מ מהבידוד בקצה אלקטרודות ה- EMG כדי להגביר את איכות אות ה- EMG.
- כסו לחלוטין את כל הפינים המולחמים בדבק אפוקסי באמצעות מקל עץ דק או פיק שיניים כדי להפחית את הרעש החשמלי במהלך הקלטות EEG/EMG.
- הכן כבל לחיבור האלקטרודה עם טבעת ההחלקה כמתואר להלן. ניתן לעשות שימוש חוזר בכבל זה.
- הלחמת כל פין של מחבר FFC/FPC בן 4 פינים באמצעות חוט של כבל שטוח בקוטר 30 ס"מ. בקיצור, הצמידו את הקצה המופשט של החוט לסיכה, הניחו מגהץ הלחמה חם על מפרק סיכת התיל, והמיסו מעט הלחמה כדי להבטיח שהלחמה מספקת תעבור בצורה חלקה לתוך המפרק.
הערה: בחר את אורך הכבל השטוח המתאים לגובה כלוב חיות הניסוי המשמש לרישומי EEG/EMG.
- הלחמה מכווצת שקעים לקצה החוטים בקצה השני של הכבל השטוח. בקצרה, החזיקו שקע כיווץ בקצה החופשי של החוט, הניחו מגהץ הלחמה חם על מפרק שקע התיל, והמיסו מעט הלחמה כדי להבטיח שהלחמה מספקת תעבור בצורה חלקה לתוך המפרק.
- הכנס כל שקע כיווץ לבית כיווץ בעל 4 מצבים.
- מכסים לחלוטין את שקעי הכיווץ בדבק אפוקסי באמצעות מקל עץ דק או קיסם.
2. השתלת אלקטרודות בראש העכבר (משך: כ-20 דקות)
- יש לעקר את כל כלי הניתוח במעקר חרוזים חם לפני הניתוח. להרדים עכבר זכר (10 - 20 שבועות, 20 - 30 גרם) עם הזרקה intraperitoneal של pentobarbital (50 מ"ג / ק"ג). לאחר בדיקה כי העכבר מורדם עמוק על ידי צביטת בוהן, לגלח את השיער על הראש והצוואר עם קוצץ.
- העבר את העכבר למסגרת הסטריאוטקסית וקבע את הראש בין 2 מוטות האוזניות. החל וזלין ג'לי על העיניים כדי למנוע יובש. נקו את העור המגולח באלכוהול וחתכו אותו לאורך קו האמצע בעזרת אזמל כדי לחשוף את הגולגולת. יש להדביק את העור כדי לשמור על אזור הניתוח פתוח.
- על ידי שימוש בחותך קרביד (גודל מקדחה: קוטר 0.8 מ"מ), קדח 2 חורים לתוך הגולגולת, אחד מעל אזור קליפת המוח הקדמית (1 מ"מ קדמי לברגמה, 1.5 מ"מ רוחבי לקו האמצע) והשני מעל האזור הקודקודי (1 מ"מ קדמי ללמדא, 1.5 מ"מ לרוחב לקו האמצע) של ההמיספרה הימנית, על פי קואורדינטות סטריאוטקסיות של פקסינוס ופרנקלין.
- על ידי שימוש במברג של תכשיטן, הניחו ברגי רישום EEG מנירוסטה בחורים ובצעו 2 - 2.5 סיבובים לכל בורג למיקום אפידורלי מעל קליפת המוח.
הערה: אין להכניס ברגים עמוקים מדי כדי למנוע נזק לרקמת המוח. בדקו שהברגים מקובעים היטב על הגולגולת. חשוב שיהיו אותות EEG יציבים במהלך תקופה ארוכה של הקלטות מרובות (בדרך כלל, יותר מחודש אחד). ברגי Wiggly מייצרים ממצאי EEG ועשויים לרדת לפני סוף לוח הזמנים של הניסוי.
- תקן את מכלול האלקטרודות (ראה סעיף 1.1, פינים הפונים כלפי מעלה) עם דבק מיידי לגולגולת וכסה אותו במלט דנטלי. צרו חורים קטנים דו-צדדיים בעזרת מלקחיים בשרירי הטרפז (הצוואר) והכניסו את חוטי הנירוסטה המשמשים כאלקטרודות EMG לתוך החורים. תפרו את העור בחוט משי (קוטר 0.1 מ"מ) כדי למנוע חשיפה של השריר.
- הסר את העכבר מהמסגרת הסטריאוטקסית. יש לתת אמפיצילין (100 מ"ג/ק"ג) ומלוקסיקאם (1 מ"ג/ק"ג) תוך צפקית לעכבר כדי למנוע זיהום חיידקי ולהפחית כאבים לאחר ניתוח, בהתאמה. שמור את העכבר על כרית חום ולפקח עליו עד שהוא חזר להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבה עצם החזה. יש לאחסן את העכבר בנפרד במהלך ההחלמה כדי למנוע הסרת אלקטרודות על ידי בעלי חיים אחרים ולתת meloxicam (1 מ"ג / ק"ג) intraperitoneally ביום הראשון לאחר הניתוח.
3. הקלטה ורכישה של נתוני EEG/EMG
- לאחר תקופת החלמה של שבוע, אחסנו כל עכבר בנפרד בכלוב ניסיוני שהונח בתא הקלטה אטום לרעש. שמור על טמפרטורת סביבה של 23 ± 1 ° C ושלוט אוטומטית במחזורים של 12 שעות אור / 12 שעות חושך (אורות דולקים בשעה 08:00, עוצמת הארה ~ 100 לוקס).
- חבר את מכלול אלקטרודות EEG/EMG בראש העכבר לכבל הקלטה. ודא שכבל ההקלטה מחובר לטבעת החלקה (המתוכננת כך שתנועות העכבר לא יוגבלו על ידי סיבוב הכבל) ולמגבר אות EEG/EMG. מסנן אותות EEG/EMG (EEG, 0.5-64 הרץ; EMG, 16-64 הרץ), דיגיטציה בקצב דגימה של 128 הרץ על ידי ממיר אנלוגי-לדיגיטלי (A/D) ולבסוף הקלטה במחשב המריץ תוכנת הקלטה EEG/EMG.
- הרגלו את העכבר במשך 2 - 3 ימים בחדר ההקלטה.
- לאחר מכן, הפעל תוכנת הקלטה EEG / EMG.
- בחר בכרטיסייה 'פרטי קובץ נתונים' ולחץ על התיבה לצד שם הקובץ. הזינו שם קובץ ולחצו על 'שמירה'.
- בחר בכרטיסייה 'תנאי הקלטה' ובחר את כל ערוצי EEG/EMG שיוקלטו.
- בחר את תדר הדגימה (128 הרץ) בכרטיסייה 'תנאי הקלטה'.
- בדוק אם הערוצים שנבחרו מוצגים כראוי בכרטיסייה 'פרטי ערוץ'.
- בחר בכרטיסייה 'הגדרת טיימר' ולחץ על 'צג' כדי להציג EEG ו- EMG.
- בדוק אם אותות EEG/EMG מוצגים כראוי.
- בחר בכרטיסייה 'הגדרת טיימר' והגדר את זמן השעון לתחילת וסוף ההקלטה באזור 'טיימר ראשי'.
- לחץ על 'צג' בכרטיסייה 'הגדרת טיימר' כדי להתחיל את ההקלטה.
- הקלט אותות EEG/EMG מתחת לקו הבסיס (כלומר, התנהגות שינה/ערות של עכבר המתנהג בחופשיות). הרדימו את העכבר בזריקה תוך-צפקית של פנטוברביטל (200 מ"ג/ק"ג) לאחר יום הניסוי האחרון.