$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. הכנת מערך מיקרו-כוננים אינטגרטיבי
- צור מערך מיקרו-כוננים עבור רישומי פוטנציאל שדה מקומי בקליפת המוח (LFP) כמתואר במקום אחר. השאר לפחות 6 חורי מתכת פתוחים בלוח ממשק אלקטרודות (EIB) לשימוש כתעלות אלקטרוקרדיוגרפיה/אלקטרומיוגרפיה/קצב נשימה (ECG/EMG/BR) המחוברות לחוטי ביופלקס כמתואר בסעיף 1.2.
- חותכים חוט ביופלקס ל-6 חתיכות באורכים של 5.0 ס"מ. מקלפים את ציפוי הפוליטטרה-פלואוראתילן (PTFE) משני הקצוות של כל חתיכות החוט באורכים של ~5.0 מ"מ. חברו קצה אחד של כל אחת מחתיכות החוט לאחד החורים המתכתיים הפתוחים (תעלות ECG/EMG/BR) ב-EIB בעזרת סיכת זהב.
- חותכים חוט אמייל לשתי חתיכות של 5.0 ס"מ. הלחמו קצה אחד של כל אחד מהחוטים האלה לתעלות הקרקע/ייחוס (g/r) ב-EIB (איור 1).
- להכנת אלקטרודות א.ק.ג. יש לחתוך חוט ביופלקס לשתי חתיכות בקוטר 16 ס"מ. יש לקלף את ציפוי ה-PTFE של קצות חתיכות חוט אלה באורכים של ~5.0 מ"מ בקצה אחד (קצה קצר) ו~15 מ"מ בקצה השני (קצה ארוך).
- יוצרים טבעת תיל בקוטר של 2.0 מ"מ על ידי כיפוף הקצה הארוך של החוט וקיבוע צורת הטבעת על ידי הלחמה.
- להכנת אלקטרודות EMG, חותכים חוט bioflex ל -2 חלקים באורכים של 8 ס"מ. מקלפים את ציפוי ה- PTFE משני הקצוות של חתיכות חוט אלה באורכים של ~ 5.0 מ"מ.
- להכנת אלקטרודות BR, חותכים חוט bioflex ל -2 חתיכות באורכים של 6.0 ס"מ. מקלפים את ציפוי האמייל של שני הקצוות של חתיכות חוט אלה באורכים של ~ 5.0 מ"מ. הלחמת קצה אחד של כל אחת מחתיכות חוט אלה לראש בורג נירוסטה (קוטר גזע: 1.0 מ"מ, אורך הגבעול: 4.0 מ"מ).
- להכנת אלקטרודות הארקה / ייחוס (גרם), חותכים חוט אמייל ל -2 חלקים באורכים של 6.0 ס"מ. מקלפים את ציפוי האמייל של שני הקצוות של חתיכות חוט אלה באורכים של ~ 5.0 מ"מ. הלחמת קצה אחד של כל אחת מפיסות חוט אלה לראש בורג נירוסטה (קוטר גזע: 1.4 מ"מ, אורך הגבעול: 3.0 מ"מ).
- גז מעקר את כל האלקטרודות וברגי הנירוסטה ושומר אותם בחלל נקי.
2. השתלת מערך המיקרו-כוננים האינטגרטיבי ואלקטרודות BR
- תקן את החולדה במכשיר סטריאוטקסי. בצע חתך של ~ 3.0 ס"מ בראש לאורך קו האמצע מהנקודה שבין העיניים לאזור הצוואר. לחשוף את הגולגולת.
- הפוך שני craniotomies עגול עם קטרים של 0.7-1.0 מ"מ מעל נורת הריח, 11.0 מ"מ קדמי 1 מ"מ דו צדדי כדי bregma עם מקדחה במהירות גבוהה. השתילו שתי אלקטרודות BR בגולגולת עד שקצות גבעולי הבורג מחוברים לפני השטח של המוח.
- הפוך שני craniotomies עגול עם קטרים של 0.7-1.0 מ"מ מעל קליפת המוח הקדמית 2.7 מ"מ קדמי ו 2.7 מ"מ דו צדדי כדי bregma. השתילו שתי אלקטרודות g/r בגולגולת עד שקצה גזע הבורג מחובר לפני השטח של המוח.
- צור שישה עד שמונה חורים בקטרים של 1.0 מ"מ באזור המקיף את הקרניוטומיה הגדולה. ברגי עיגון השתל (קוטר גזע: 1.4 מ"מ, אורך גזע: 3.0 מ"מ) בגולגולת.
- בצע קרניוטומיה עגולה גדולה בקוטר של ~ 2.0 מ"מ מעל ההיפוקמפוס 3.8 מ"מ אחורי ו 2.5 מ"מ דו צדדי לברגמה. מקם את מערך המיקרו-כונן האינטגרטיבי כך שקצה הצינורית של מערך הכוננים ממוקם מעל הקרניוטומיה הגדולה
- מלא את חלל הרווח בין קצה הצינורית לבין פני השטח של המוח ב~100 μL של שתי תמיסות, כלומר, 0.5% (לפי מסה) נתרן אלגינט ו-10% (לפי מסה) סידן כלורי.
הערה: תהליך זה יוצר ג'ל שקוף תוך ~5 דקות, לאחר ערבוב שתי התמיסות על הגולגולת.
- כסו את הצינורית, אלקטרודות BR, אלקטרודות g/r וברגי עיגון במלט דנטלי בעובי של 0.5 ס"מ. היזהרו שלא לכסות את הקצוות הפתוחים של אלקטרודות BR ו-g/r במלט בשלב זה.
- הלחמת את הקצוות הפתוחים של אלקטרודות ECG, EMG, BR ו- G/R לקצוות החוטים הבודדים שהיו מחוברים בעבר ל- EIB (ראה שלבים 1.2 ו- 1.3).
- כסו את החלק התחתון של מערך המיקרו-כוננים האינטגרטיבי, ואת כל חוטי האלקטרודות, במלט דנטלי. ודאו שכל חוטי האלקטרודות מכוסים לחלוטין, כך שהחולדה לא תוכל לגרד אותם לאחר ההשתלה.
- לאחר שחזרו להכרה מספקת כדי לשמור על עצם החזה, החזירו את בעל החיים לכלוב הביתי השקוף מפרספקס, והחזיקו אותו לבדו עם גישה חופשית למים ולמזון. לאחר הניתוח, לטפל בחיה עם אנטיביוטיקה (gentamicin).
3. הקלטות Vivo
הערה: כל האותות מועצמים, נדגמים ב- 2 kHz ומסוננים במעבר פס (0.1 - 500 Hz) למעט פעילויות יחידה (שנדגמו ב- 30 kHz ו- bandpass מסונן (500 - 6 kHz)).
- חבר את ה-EIB של מערך המיקרו-כוננים האינטגרטיבי לשלב הראש של התקן הקלטה.
- מקדמים את הטטרודים על ידי סיבוב הברגים למשך מספר שבועות לאחר הניתוח. ברגע שהטטרודים סמוכים לאזורי המטרה במוח, מקמו את הטטרודים באזורים במשך תקופה של מספר ימים לקבלת הקלטות יציבות.
- עקוב אחר האותות החשמליים בזמן שהחיה נעה בחופשיות בתא הקלטה.
