ניטור קליפת המוח באמצעות מערך אלקטרודות מרובות בתגובה לגורמים הגורמים להתקפים

תקציר

מקור: Lu, H. C., et al. גירוי זרם ישיר ורישום מערך רב אלקטרודות של פעילות דמוית התקף בהכנת פרוסות מוח של עכברים. J. Vis. Exp. (2016).

בסרטון זה נחקרות ההשפעות של גירוי זרם ישיר טרנס-גולגולתי (tDCS) על פרוסות מוח המכילות את פיתול החגורה הקדמי (ACC) ואת אזורי התלמוס, תוך שימוש במערך רב-אלקטרודות (MEA) למדידת אותות חשמליים. על ידי העברת פולסים חשמליים ועירוי תרופות הגורמות להתקפים, המחקר חוקר את תגובת ACC להתקפים.

פרוטוקול

כל ההליכים הנוגעים לדגימות בעלי חיים נבדקו ואושרו על ידי הוועדה המתאימה לבדיקה אתית של בעלי חיים.

1. הכנת תמיסה ניסיונית וציוד להקלטת MEA (Multielectrode Array)

1. הכן נוזל שדרה מוחי מלאכותי (aCSF; 124 mM NaCl, 4.4 mM KCl, 1 mM NaH₂PO₃, 2 mM MgSO₄, 2 mM CaCl₂, 25 mM NaHCO₃ ו- 10 mM גלוקוז, מבעבע עם 95% O₂ ו- 5% CO₂).
2. השתמש בשני סוגים של בדיקות MEA: 6 x 10 מישורי MEA ו- 8 x 8 MEA. הגשושית הראשונה מכסה את האזור הכולל את קליפת המוח, הסטריאטום והתלמוס. הבדיקה האחרונה מכסה רק את האזור קליפת המוח.
3. השתמש במגבר של 60 ערוצים עם ....

תוצאות

איור 1: הכנת פרוסת Thalamocingulate והגדרת מערכת הקלטה MEA. (A) הליך פרוסת MT-ACC (א) הסר את המוח ו-(ב) העבר ל-aCSF מחומצן קר. (ג) בצע שני חתכים פאראסגיטליים מקו האמצע. (ד) מבט מהצד על החלק המדיאלי של גוש המוח. (ה) לבצע שני חתכים גחונים זוויתיים של גוש המוח. (ו) הדביקו את גוש המוח על צלחת פלסטיק זוויתית. (ז) בצעו חתך גבי ופתחו את גוש המוח. (ח) הדביקו את גוש המוח בוויברטום. (i) אספו פרוסות מגוש המוח. .......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
איזופלורן	תאגיד מוצרי Halocarbon	NDC 12164-002-25	4%
aCSF (סה"כ:1 L):
D(+)-גלוקוז	מרק	1.08337.1000	10 מ"מ
נתרן מימן פחמתי	מרק	1.06329.0500	25 מ"מ
נתרן כלורי	מרק	1.06404.1000	124 מ"מ
(+)-נתרן L-אסקורבט, >=98%	סיגמא	A4034-100G	0.15 גרם/2 צלזיוס
מגנזיום גופרתי, נטול מים, ReagentPlus	סיגמא	M7506-500G	2 מ"מ
סידן כלורי דיהידראט	מרק	1.02382.1000	2 מ"מ
נתרן דימימן פוספט מונוהידראט	מרק	1.06346.1000	1 מ"מ
אשלגן כלורי	מאי & בייקר בע"מ דאגנהאם, אנגליה	MS 7616	4.4 מ"מ
(+)-Bicuculline	טוקריס	130	5 מיקרומטר ב- aCSF
4-אמינופירידין	טוקריס	940	250 מיקרומטר ב-aCSF
ויברטומה	ויברטומה	סדרה 1000	חוסמים את החיתוך לפרוסות בעובי 500 מיקרומטר
בדיקות מערך מרובה אלקטרודות (MEA): 6 x 10 מישורי MEA	מערכות רב ערוציות	60MEA500/30iR-Ti-pr MEAS 6x10	קוטר אלקטרודה, 30 מיקרומטר; מרווח בין אלקטרודות, 500 מיקרומטר; עכבה, 50 kΩ ב-200 הרץ
בדיקות מערך מרובה אלקטרודות (MEA): 8 x 8 MEA	איינדה ביוסיסטמס	60MEA200/10iR-Ti-pr MEAS 8x8	אלקטרודה בצורת פירמידה; קוטר, 40 מיקרומטר; גובה קצה, 50 מיקרומטר; מרווח בין אלקטרודות, 200 מיקרומטר; עכבה, 1,000 kΩ ב-200 הרץ
שימוש במגבר של 60 ערוצים עם מסנן פס שהוגדר בין 0.1 הרץ ל-3 קילוהרץ בהגברה של 1,200X	מערכות רב ערוציות	MEA-1060-BC
תוכנת MC Rack בקצב דגימה של 10 KHz	מערכות רב ערוציות		תוכנה לאיסוף נתונים והקלטות
שליטה על מחולל דופק	מערכות רב ערוציות	STG 1002
פרוסות ערכות עיגון והחזקות	וורנר אינסטרומנטס	שד-26ח/10; WI64-0250
משאבה פריסטלטית מיניפולסים3	גילסום	MINIPULS3	קצב זילוח : 8 מ"ל/דקה
ממריץ מבודד	מערכות A-M	דגם 2100	עוצמה של ±350 μA , משך של 200 μsec
אלקטרודת טונגסטן	מערכות A-M	575300	ממוקם בתלמוס

נעשה