מאמר שיטה

הערכת היווצרות קשרים עצביים בתרבות משותפת באמצעות רישומים אלקטרופיזיולוגיים

8 ביולי 2025

במאמר זה

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Su, C. T. E., et al. גישה אופטוגנטית להערכת היווצרות קשרים עצביים במערכת תרבות משותפת. J. Vis. Exp. (2015)

הסרטון מדגים הקלטה אלקטרופיזיולוגית להערכת קשרים עצביים בין נוירונים קליפת המוח שמקורם ב-iPSC לבין נוירונים בקליפת המוח של חולדות, ומאשר מגעים סינפטיים בתרבית המשותפת על ידי הפעלת תעלות יונים רגישות לאור וזיהוי זרמים פוסט-סינפטיים.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. הקלטות אלקטרופיזיולוגיות של תאי עצב שמקורם ב-iPSC

  1. אשרו אם תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים אנושיים מתנהגים כמו תאי עצב בוגרים.
    1. מצא תאים המובחנים מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים אנושיים על ידי הדמיה של tdTomato באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי זקוף המצויד בעדשת טבילה במים 60X (0.9 NA).
    2. משוך את פיפטת ההקלטה להתנגדות של 4 עד 6 M. תאי ניקוז בטמפרטורת החדר בתמיסה חיצונית מבעבעת כל הזמן עם 95% O2 / 5% CO2. מלא את מיקרופיפטת ההקלטה בתמיסה הפנימית.
    3. תקן תא tdTomato+ במצב תא שלם ורשום ירי פוטנציאלי לפעולה בתגובה להזרקה הנוכחית (משך של שנייה אחת, הפרשים של 10 pA) במהדק הנוכחי.
  2. אשרו אם פוטנציאל הפעולה של תאי קליפת המוח המבטאים ChR2 מעורר באופן אמין על ידי גירוי אור.
    1. מצא תאים קורטיקליים המבטאים ChR2 על ידי הדמיה של GFP תחת מיקרוסקופ קונפוקלי. בצע רישום מהדק טלאי של תאים שלמים על תאי קליפת המוח על-ידי ביצוע שלבים 1.1.2 עד 1.1.3.
    2. בדוק שפוטנציאל הפעולה מתעורר באופן אמין על ידי תאורת אור עם מנורת קשת כספית (100 W). אורך הגל של מסנן העירור הוא 480/40 ננומטר.
  3. לבצע גירוי אופטוגנטי.
    1. תקן תא tdTomato+ במצב תא שלם והגדר מהדק מתח על -70mV. סנן אותות זרם ב- 2 kHz והפוך לדיגיטלי ב- 10 kHz. צג התנגדויות סדרה בטווח של 10 עד 20 מ 'לעקביות במהלך הקלטות.
    2. עורר את כל השדה עם מנורת כספית של 100 ואט עם מסנן עירור של 480/40 ננומטר למשך 30 שניות.
    3. תיעוד זרמים פוסט-סינפטיים (PSCs) של תאים מתוקנים המושרים על ידי פוטו-טימולציה של נוירונים קדם-סינפטיים בקליפת המוח המבטאים ChR2. זיהוי ומדידה של PSC.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
NaClסיגמאS7653
KClסיגמאP5405
NaHCO3סיגמאS5761
נה"ה 2ת.ד. 4פלוקה71505
MgCl2סיגמאM8266
CaCl2סיגמאC1016
D(+)-גלוקוזסיגמאG7520למחקרים אלקטרופיזיולוגיים
קיי-גלוקונאטסיגמאעמ' 1847
קוקאנטו כימיקל3234400
HEPESסיגמאH3375למחקרים אלקטרופיזיולוגיים
EGTAסיגמאE3889
Na2ATPסיגמאA7699
Na3GTPסיגמאG8877
נימי זכוכית בורוסיליקטמכשירים מדויקים בעולם, Inc1604323
מנורת קשת קצרה מרקוריאוסרםHBO 103 עם 2

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Patch ClampiPSC

מאמרים קשורים