בדיקת תפקוד עצבי תחושתי במודל עכבר מעוכב כירורגי

Abstract

מקור: Peterson, S. C. et al., Cutaneous surgical Denervation: שיטה לבדיקת הדרישה לעצבים במודלים עכבריים של מחלות עור. J. Vis. Exp. (2016)

סרטון זה מדגים בדיקת תפקוד עצבי תחושתי במודל עכבר על ידי ניתוק כירורגי של צד אחד והשארת הצד השני כבקרה. התגובה לגירוי מכני מאשרת את תפקידם של העצבים התחושתיים.

Protocol

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. ניתוק עצבים כירורגי

1. הזריקו את תמיסת ההרדמה תוך צפקית במינון של 200 μl לכל 20 גרם משקל גוף עכבר. בדוק כי בעל החיים הגיע למישור הנכון של הרגעה על ידי בדיקת צביטת בוהן, וודא כי קצב הלב והנשימה הם נורמליים (כ 600 פעימות ו 160 נשימות לדקה, בהתאמה).
2. הכינו את האזור הכירורגי של עור הגב באמצעות בטדין ומגבוני אלכוהול, וכסו את בעל החיים בוילון כירורגי סטרילי (לצורך הדגמה, הושמט וילון סטרילי כדי להגביר את הראות). שמרו על חום הגוף של בעל החיים באמצעות כרית חימום בזמן שאתם פועלים באזור כירורגי אספטי.
3. בצע חתך באמצעות אזמל #11 סטרילי לאורך קו האמצע הגבי מבסיס הצוואר עד בערך 0.5 ס"מ מעל הזנב.
4. באמצעות מלקחיים קהים, שיקפו בעדינות את העור בצד שמאל הרחק מהאגף כדי לדמיין את הרקמה הבסיסית מכריות השומן השכמה ליד הצוואר ועד ממש מעל הגפה האחורית.
   הערה: עצבים עוריים גביים מופיעים כגדילים לבנים שנעים בצורה קאודלית דרך הפאשיה השקופה של דופן תא המטען לפני שהם מבצעים עיקולים חדים ונכנסים לרקמת החיבור הרופפת שמתחת לעור (איור 1).
5. באמצעות מלקחיים עדינים במיוחד תחת מיקרוסקופ אור מנתח, הסירו את העצבים אך ורק מהצד השמאלי של החיה הממוקמת באתרים אנטומיים T3-12 על-ידי מריטה מהמקום שבו המקטעים מתכופפים בדופן תא המטען אל אתרי הכניסה שלהם לתוך העור (איור 1).
   1. מלקחיים מכוונים אנכית ומסירים את העצבים על-ידי אחיזה של כ-0.5 ס"מ מתחת לאתרי הכיפוף שלהם ומשיכה כלפי מעלה, מה שגורם לעצב להימתח ולהיפרד מהרקמה שמסביב (איור 1C-E). יש להקפיד להימנע מקרע בכלי הדם הסמוכים.
   2. המשך עד שכל העצבים המשתרעים מדופן תא המטען אל העור מוסרים. אין לשבש את העצבים בתוך הפאשיה הצפופה של דופן תא המטען. שמור על לחות הרקמה לאורך כל ההליך על ידי החלת טיפות תקופתיות של תמיסת מלח סטרילית 0.9%.
   3. לחלופין, הסירו עצבים על ידי אחיזת הקצוות הפרוקסימליים שלהם ליד דופן תא המטען במלקחיים וצליפה במספריים עדינים. לאחר מכן, חתכו את הקצוות הדיסטליים ליד העור (איורים 1F-H). לבסוף, הסירו את מקטעי העצבים המתערבים (איור 1I).
6. הסר את כל העצבים מדש העור שנחשף בשלב 1.4. סיבים אלה מרכיבים את הענפים הדיסטליים של העצבים העוריים הגביים ומופיעים כגדילים מסתעפים לבנים הממוקמים באופן ספורדי בתוך רקמת החיבור בצד העורי של דש העור (איורים 1J-K).
   1. כדי להסיר את הענפים העדינים הללו, מקמו את המלקחיים העדינים בערך במקביל למשטח העור, אחזו בעצבים וקטפו כלפי מעלה כדי למנוע הפרעה לכלי הדם וניקוב העור. המשך עד שכל העצבים הנראים לעין הוסרו.
7. באמצעות דיסקציה קהה, לשקף את העור בצד ימין של חתך קו האמצע הגבי, אבל לא להסיר את העצבים. זה ישמש כשליטה המופעלת על ידי דמה נגדית.
8. תפר לאורך קו האמצע הגבי בתבנית קטועה פשוטה לסגירת החתך באמצעות תפרי ניילון 6-0, בתבנית קטועה פשוטה במרווח של כ-3 מ"מ זה מזה.
9. אין להחזיר עכברים שעברו ניתוח לאותו כלוב כמו בעלי חיים אחרים עד לאחר החלמה מלאה.
10. יש לעקוב אחר בעלי חיים מיד לאחר הניתוח עד שהם חוזרים להכרה, וגם מדי יום עד שאזור הניתוח נרפא, בדרך כלל תוך שבוע. השתמש במשככי כאבים בהתאם להנחיות מוסדיות ייעודיות לטיפול בבעלי חיים והשתמש אם עכברים מראים סימני כאב או מצוקה. יש להסיר תפרים תוך 7-10 ימים לאחר הניתוח. הערה: במידת הצורך, הכינו תמיסה משככת כאבים על ידי דילול קרפרופן (50 מ"ג/מ"ל תמיסת סטוק) 1:100 במים סטריליים. הזריקו את התמיסה תת עורית בין השכמות ליד קשקוש הצוואר, במינון של 200 מיקרוליטר לכל 20 גרם משקל גוף (5 מ"ג/ק"ג משקל גוף עכבר).
11. כדי להעריך באופן פונקציונלי ניתוק עצבים יציב עד מספר שבועות לאחר הניתוח, יש להסיר את השיער מהעור הגבי באמצעות קוצץ חשמלי.
12. דקרו בעדינות את אזור העור הצפוף באמצעות מחט היפודרמית, ושימו לב אם בעל החיים מגיב, בדרך כלל על ידי רעד או סיבוב ראשו. אם אזור העור עבר דנוורציה יציבה, בעל החיים יפגין תגובה מועטה או כלל לא.

Results

איור 1. שתי גישות לעיבוד העור הגבי. (A) דיאגרמה מצוירת של עור עכבר עצבני. קווים מקווקוים אדומים מציינים כריתה יחידה שנעשתה לאורך קו האמצע הגבי כדי לחשוף את השרירים הבסיסיים על דופן תא המטען (סגול) כמו גם את הדרמיס (אפור, כוכבית) מתחת לעור המוחזר. עצבים עוריים גביים הנעים בצורה קאודלית נראים כ"מתכופפים" כשהם עוזבים את דופן תא המטען (החץ השחור מציין כיפוף כזה). מקטעי עצבים שיש לכרות מסומנים בקווים מ...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
תחבושות להכנת אלכוהול	PDI	B339
AnaSed (קסילזין)	לויד	נאדה 139-236
רפידות הכנה לבטדין	מדליין	MDS093917
קרפרופן (רימדיל)	זואטיס
קוצץ אלחוטי נטען	וואהל	גוזם דגם 8900
6-0 תפרי ניילון	DemeTECH	NL166012F4P
מלקחיים עדינים במיוחד	דומונט	0103-5-ת.ד