$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. כירורגיה
הערה: הפרטים המדויקים של הניתוח לגירוי בלולאה סגורה תלויים בסוג בדיקות ההקלטה שבהן נעשה שימוש ובאזורי המוח הממוקדים. ברוב המקרים, עם זאת, ניתוח טיפוסי יכלול את השלבים הבאים.
- הביאו כלוב עם חולדה לחדר הניתוח כדי להשתיל בו גשושית סיליקון או מערך אלקטרודות כדי להקליט את הפעילות העצבית.
- מרדימים את המכרסם עם 2-2.5% isoflurane ולתקן את הראש במסגרת סטריאוטקסית. ודא כי בעל החיים הוא מחוסר הכרה במהלך הניתוח על ידי התבוננות בכל תגובה מוטורית לגירויים מישוש קל.
- יש למרוח משחת עיניים כדי למזער יובש במהלך הניתוח.
- יש לגלח את אזור הניתוח ולחטא את העור בתמיסת 2% כלורהקסידין ו-70% איזופרופיל אלכוהול.
- הזריקו לידוקאין (5 מ"ג/ק"ג) מתחת לקרקפת מעל אזור המוח שבו יושתלו אלקטרודות.
- בצע חתך של הקרקפת מעל אזור השתל העתידי, והשתמש באזמל ובמקלון צמר גפן כדי לנקות את הפריאוסטאום מהגולגולת החשופה.
- קדח 4-8 חורים בגולגולת להשתלת ברגי עוגן (~0.5 מ"מ) כתמיכה מבנית לשתל. חברו את הברגים לגולגולת על ידי הכנסתם לחורים וודאו שהם מוחזקים היטב במקומם.
- קדח את הקרניוטומיה בקואורדינטות שצוינו והכנס את שתל המיקרודרייב/בדיקה.
הערה: הפרוטוקול המתואר לגירוי בלולאה סגורה יעבוד עבור כל אזור במוח שבו מוחדרות האלקטרודות.
- תקן את המיקרו-כונן/בדיקה וכל מחבר ממשק חשמלי נדרש לגולגולת באמצעות אקריליק דנטלי. כמות אקריליק דנטלי צריכה להספיק כדי לחבר את השתל בחוזקה, אך הוא לא אמור לבוא במגע עם הרקמה הרכה שמסביב.
- לאחר הניתוח, יש לעקוב מקרוב אחר בעל החיים עד שהוא חוזר להכרה מספקת כדי לשמור על עצם החזה. במשך שלושת הימים שלאחר מכן, יש לתת באופן תת-עורי משכך כאבים (למשל, Metacam, 1 מ"ג/ק"ג) ואנטיביוטיקה למניעת זיהום (למשל, אנרופלוקסצין, 10 מ"ג/ק"ג).
הערה: בעלי חיים נותרים בדרך כלל להתאושש מניתוח במשך שבוע לפני כל בדיקה או הקלטה.
2. התקנת תוכנה
הערה: פעולה זו נבדקה ב- Windows 10, גירסת 64 סיביות.
- התקן תוכנה לאיסוף ועיבוד נתונים.
- התקן את מערכת רכישת הנתונים Cheetah 6.4 (https://neuralynx.com/software/category/sw-acquisition-control), הכוללת ספריות לאינטראקציה עם מערכת רכישת ברדלס.
- התקן את SpikeSort3D (https://neuralynx.com/software/spikesort-3d) או כל תוכנה אחרת המשתמשת ב- KlustaKwik27 למיון דוקרנים. תוכנת הזיהוי המקוונת משתמשת בהגדרות האשכול ממנוע KlustaKwik. תוכנה זו עשויה לפעול באותו מחשב או במחשבים נפרדים באותה רשת.
- התקן את NetComDevelopmentPackage (https://github.com/leomol/cheetah-interface/blob/master/NetComDevelopmentPackage_v3.1.0), אשר ניתן להוריד גם מ https://neuralynx.com/software/netcom-development-package.
- התקינו את Matlab (https://www.mathworks.com/downloads/; הקוד נבדק בגרסת Matlab R2018a). ודאו ש-Matlab מופעלת בחומת האש של Windows. בדרך כלל, חלון קופץ יופיע במהלך החיבור הראשון.
- התחברו לחשבון Matlab. בחר את הרישיון. בחר את הגירסה. בחר את מערכת ההפעלה.
- הורד את הספרייה הבאה להפעלת אירועים מקוונים מ- https://github.com/leomol/cheetah-interface וחלץ קבצים לתיקיית 'מסמכים/Matlab' במחשב. עותק של הקוד מסופק בחומרים המשלימים הנלווים.
3. איסוף נתונים ראשוני
- התחל איסוף נתונים באמצעות תוכנת Cheetah.
- הקלט כמה דקות של נתונים קוצים כדי לאכלס צורות גל של תבנית.
- עצור את איסוף הנתונים ובצע מיון ספייק על הנתונים המוקלטים.
- פתח את SpikeSort3D, לחץ על קובץ | תפריט | טען קובץ ספייק ובחר קובץ ספייק מהתיקיה עם נתונים מוקלטים.
- לחץ על תפריט אשכולות, לאחר מכן אשכול אוטומטי באמצעות KlustaKwik, עוזב את הגדרות ברירת המחדל ולחץ על הפעל.
4. ניסוי בלולאה סגורה
- חידוש איסוף נתונים בצ'יטה.
- פתחו את Matlab.
- פתח את Closed Loop.m ולחץ על הפעל. לחלופין, בחלון הפקודה Matlab, הפעל את Closed Loop() . ודא ש- Closed Loop.m נמצא בנתיב Matlab. אם המשתמש רוצה להשתמש בפונקציה מותאמת אישית כדי לקרוא לכל גורם מפעיל, בצע את Closed Loop('-callback', customFunction) במקום זאת, כאשר customFunction הוא נקודת אחיזה לפונקציה זו.
- טען את מידע הספייק שהוגדר בהקלטה הראשונית על ידי לחיצה על טען, גלישה בתיקיית ההקלטה ובחירת אחד מקבצי הנתונים הדוקרנים (.ntt, .nse).
- בחר תא עצב אחד או יותר שיפעילו גירוי על-ידי לחיצה על תיבת הסימון מתחת לצורות הגל המשורטטות.
- הגדר את המספר המינימלי של תאי עצב שיפעילו גירוי על-ידי הקלדת מספר שלם בתיבת הטקסט "התאמות דקות". לאחר מכן, הגדר את חלון הזמן שבו קוצים התואמים לצורות גל שונות נחשבים לפעילים משותפים על ידי הקלדת מספר בתיבת הטקסט "חלון".
- לחץ על שלח כדי להתחיל. זה יתחיל הפעלה מקוונת של אירועים (צלילים כברירת מחדל) בהתבסס על פעילות הדוקרנים של נוירונים נבחרים.