מאמר שיטה

הערכת ההשפעות של רעלים על התפתחות הרשת העצבית של עוברי אפרוחים באמצעות מערכים מרובי אלקטרודות

8 ביולי 2025

במאמר זה

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Sanchez, K. R., et.al. הערכת ההשפעות של תרכובות משבשות אנדוקריניות על התפתחות תפקוד הרשת העצבית של בעלי חוליות באמצעות מערכים מרובי אלקטרודות. J. Vis. Exp. (2018).

סרטון זה מדגים את השימוש במערכים מרובי אלקטרודות (MEA) כדי לחקור את ההשפעות של רעלים על תרביות עצביות מוקדמות של אפרוחים עובריים. על-ידי ניטור הפעילות הסינכרונית של תאי העצב ברשת העצבית, MEA לוכד את הדינמיקה התפקודית של הרשת העצבית בתגובה לחשיפה לרעלנים. ירידה בסנכרון ובשיעורי הירי בעת חשיפה לרעלנים מדגישים את השפעתו המזיקה על הבשלת הרשת העצבית ותפקודה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. הקלטת פעילות הרשת העצבית

  1. ביום הרכישה, החליפו את מדיום התרבית בתווך נוירובזאלי טרי והחזירו את MEAs לחממת CO2 למשך שעתיים לפחות לפני ההקלטה. הפעל את תוכנת ההקלטה והגדר את הטמפרטורה של MEA ל -37 °C על ידי לחיצה על סמל הטמפרטורה.
    הערה: ההקלטה יכולה להתחיל כבר ביום השלישי של הציפוי ויכולה להימשך כל עוד התרביות בחיים.
  2. הגדר את פרמטרי הרכישה על ידי לחיצה ימנית על סמל "Muse" (תחת זרמים בחלונית החלון השמאלי) ובחר "הוסף עיבוד" ו "גלאי ספייק" ולחץ על אישור בחלון הקופץ. "גלאי ספייק (6 x STD)" יופיע מתחת לשם הקובץ.
  3. לאחר מכן לחץ לחיצה ימנית על גלאי ספייק, בחר "הוסף עיבוד" ו "גלאי פרץ" ולחץ על אישור בחלון הקופץ. "גלאי פרץ" (ISI) יופיע מתחת לסמל Muse.
  4. לאחר מכן לחץ לחיצה ימנית על גלאי פרץ, בחר "הוסף עיבוד" ו "מהדר סטטיסטיקה עצבית". בחלון הקופץ, ודא שנבחרו האפשרות כותרת קובץ, סטטיסטיקה מצטברת היטב וסנכרון. לחץ על אישור. "מהדר סטטיסטיקה" יופיע למטה.
    הערה: פעולה זו תגדיר את חציית הסף האדפטיבית (מסנן STD 6x), את מרווח הספייק בין הדוקרנים ב- 100 אלפיות השנייה עם מספר מינימלי של קוצים ב- 5, את זיהוי קצב הירי הממוצע ב- 10 שניות עם פרמטר סינכרוני ב- 20 אלפיות השנייה, ואת קצב הזינוק המינימלי ב- 0.083333 קפיצות לדקה.
  5. הגדר את ההקלטה המתוזמנת לזמן הקלטה של 5 דקות (300,000 אלפיות השנייה) על ידי לחיצה על סמל השעון בתחתית. זה מושג על ידי שינוי המידע בסעיף ההגדרה להקליט כל 5.1 דקות ולהקליט במשך 5 דקות. פעולה זו תופעל באופן מיידי ותבוצע פעם אחת.
  6. ודא שהטמפרטורה של MEA הגיעה ל -37 ° C לפני העברת MEA. הוציאו את ה-MEA מהאינקובטור, הניחו אותו על יחידת ההקלטה ונעלו את ה-MEA. התחל להקליט את פעילות הרשת על ידי לחיצה על הקלטת ההתחלה בקטע ההקלטה המתוזמנת או על סמל ההקלטה בחלון "הפעלת קבצים". בדרך כלל, זמן הקלטה של 5 דקות (300,000 אלפיות השנייה) מספיק, אם כי ניתן להשיג הקלטות ארוכות יותר של עד 10 דקות.
  7. לאחר ההקלטה, להחזיר את MEA לחממה.
    הערה: יש להקפיד לשמור על סטריליות ולמזער את הזמן שה-MEA נמצא מחוץ לחממה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Axion Muse MEAאקסיון ביוסיסטמסM64-GL1-30Pt200תיקרא מערכת MEA בכתב יד
תוכנת ציראקסיון ביוסיסטמסתיקרא תוכנת הקלטה בכתב היד
BPAסיגמא-אולדריץ'239658-250 גרם
EtOHסיגמא-אולדריץ'64-17-5
מדיום נוירובזאליBrainBitsנב4-500
תוכנה סטטיסטית Neuroexplorerנקס טכנולוגיותNeuroexplorer גרסה 5

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים