טכניקה לשאיפה ועיבוד מלעורי של זרע אפידידימלי

תקציר

סרטון זה מדגים את השאיפה המלעורית של זרע אפידידימלי מחולה עם אזוספרמיה, מצב המאופיין בהיעדר זרעונים בזרע. ההליך כולל חיטוי אזור שק האשכים, שאיבת נוזל אפידידימלי באמצעות מזרק עם תמיסת תרבית מיוחדת ועיבוד הדגימה שנאספה כדי לבודד זרעונים ברי קיימא. הזרעונים המוכנים מוכנים לאחר מכן לשימוש בהליכים מתקדמים לטיפול בפוריות.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים משתתפים אנושיים בוצעו בהתאם להנחיות המוסדיות, הלאומיות והבינלאומיות לרווחת האדם ונבדקו על ידי מועצת הביקורת המוסדית המקומית.

1. הכנה טרום ניתוחית

1. הכנת ציוד כירורגי
   1. הכנת הציוד הדרוש להליך הכירורגי, כולל חבילת מכשירים כירורגיים אחת, שני מזרקים של 5 מ"ל המצוידים במחט 0.7 מ"מ (0.7 x 32 שיפוע ארוך דופן דק (TWLB)), תמיסת חיטוי של 60 מ"ל, שני זוגות כפפות גומי סטריליות וחתיכה אחת של חבישה דביקה סטרילית.
   2. בקש מהאחיות לבחון את חבילת המכשירים הכירורגיים הנתונה לעיקור קיטור בלחץ גבוה לאיתור כל נזק או תפוגה. לאחר אישור שהוא נקי מכל בעיה, הנח אותו על שולחן המכשירים ופתח את השכבה החיצונית.
   3. לאנדרולוגים: לבשו כפפות גומי סטריליות, ואז פתחו את השכבה הפנימית של חבילת המכשירים הכירורגיים כדי לבדוק אם סרט חיווי העיקור מוסמך או לא, כמו גם לוודא שכל המכשירים בפנים שלמים.
   4. הכן שני מזרקים של 5 מ"ל המצוידים במחטים של 0.7 מ"מ (0.7 x 32 TWLB) להרדמה וניתוח, ולאחר מכן פתח את האמפולה המכילה הזרקת לידוקאין.
   5. השתמש במזרק סטרילי של 5 מ"ל כדי לשאוב את הזרקת הלידוקאין, ולאחר מכן לחסל את בועות האוויר מהמזרק.
2. הכנת מטופל שעובר ניתוח
   1. לארגן את הכנת העור למטופל. גלחו את ערוות הפרינאום באמצעות סכין גילוח חד פעמי ושטפו את הפרינאום והעור שמסביב במי סבון כדי לוודא שאין עודפי ערווה או כתמים.
   2. מקם את המטופל על שולחן הניתוחים בתנוחת ליטוטומיה, הסר את המכנסיים ואבטח את הבגד העליון מעל הטבור כדי לחשוף במלואו את הפרינאום והבטן התחתונה מתחת לטבור.
   3. כוונן את זווית המנורה ללא צל על מנת להאיר את שק האשכים של המטופל.
   4. השתמש במלקחיים סגלגלים כדי לאחוז בכדור גזה סטרילי, אשר לאחר מכן טובל במלואו בתמיסת חיטוי כדי להתחיל את תהליך החיטוי. בצע חיטוי עור מהפריפריה לשק האשכים בסדר הבא: בטן תחתונה, קדמית ופנימית של הירכיים, אזור הפרינאום, הפין ושק האשכים.
   5. לאחר החיטוי הראשוני, החלף את כדור הגזה הסטרילי וחזור על תהליך החיטוי. לאחר שלושה סבבי חיטוי, תהליך החיטוי לפני הניתוח הושלם.
   6. התחל בתהליך הנחת מגבות סטריליות לאחר סיום החיטוי. ראשית, הניחו מגבת מרובעת סטרילית מתחת לישבן המטופל, ולאחר מכן פרשו מגבת סטרילית סביב אזור הניתוח וסביבתו, וחשפו לחלוטין את שק האשכים באזור החור.
3. הכנת תמיסת תרבית G-MOPS-PLUS
   1. בקש מטכנאי חדר התרבות העוברית להעביר כ-2 מ"ל של תמיסת תרבית G-MOPS-PLUS לתוך צלחת התרבית באמצעות פיפטה סטרילית של פסטר. סגור כראוי את המכסה, ולאחר מכן העביר אותו לאחות בחדר הניתוח דרך חלון ההעברה.
   2. הניחו את צלחת התרבות על המגבת הסטרילית שעל שולחן המכשירים ופתחו את המכסה.
   3. בעזרת מזרק נוסף של 5 מ"ל, יש לשאוב כ-0.2 מ"ל של תמיסת תרבית G-MOPS-PLUS, ולאחר מכן להסיר את בועות האוויר לשימוש עתידי.

2. הרדמה וניתוח

1. } לאנדרולוגים: החזיקו את המזרק המלא בהזרקת לידוקאין ביד ימין תוך קיבוע חוט הזרע של המטופל ביד שמאל. יש לנקב תת עורית ולהזריק כמות קטנה של לידוקאין ליצירת שרוול. לאחר מכן, יש לנקב תת עורית ולהעמיק ברקמת חוט הזרע, ולהתחיל להזריק כ-0.5 מ"ל לידוקאין לאחר אישור אי החזרת דם. כדי להשיג אפקט טוב יותר של הרדמה בחסימת חוט הזרע, שנה את כיוון מחט ההזרקה 2 עד 3 פעמים באותה נקודת ניקוב וחזור על פעולת הזרקת לידוקאין לחוט הזרע.
2. החזק את שק האשכים של המטופל ביד שמאל, ואבטח את האפידידימיס הדורש ניקוב. על ידי מישוש, אשר את מיקום האפידידימיס שבו יש צורך בניקוב הניתוחי באמצעות יד ימין. לאחר מכן, החזק את המזרק המכיל לידוקאין שהוזכר לעיל והזריק אותו מתחת לעור במקום הניקוב כדי להשיג הרדמה מקומית לחדירה.
3. החזק את שק האשכים של המטופל ביד שמאל, ואבטח את האפידידימיס הדורש ניקוב. לאחר מכן, החזק את המזרק בנפח 5 מ"ל המכיל תמיסת תרבית G-MOPS-PLUS (0.2 מ"ל) ביד ימין ונקב בניצב לעור, חודר לרקמת האפידידימלית. שמרו על לחץ שלילי במזרק ונקבו שוב ושוב את רקמת האפידידימל כך שהנוזל האפידידימלי ייכנס דרך המחט בהשפעת לחץ שלילי.
4. המשיכו לשמור על לחץ שלילי ומשכו לאט לאט את מחט הפנצ'ר. הזרקו את הנוזל האפידידימלי המופק לתוך צלחת התרבית. לאחר השלמת ההזרקה, יש לשאוף תמיסת תרבית G-MOPS-PLUS בקרבת מקום כדי לשטוף את המזרק על מנת למקסם את כמות הנוזל האפידידימלי שנאסף המוזרק לכלי התרבית.

3. טיפול בדגימות כירורגיות

1. חיפוש ותצפית על זרעונים אפידידימליים
   1. העבירו את צלחת התרבית המכילה נוזל תרבית G-MOPS-PLUS ונוזל אפידידימלי לטכנאי מעבדת העוברים דרך חלון ההעברה.
   2. טכנאי חדר התרבות העוברית משתלטים על צלחת התרבות ומניחים אותה על במת מיקרוסקופ אופטי הפוך, ומאבטחים אותה. הפעל את מתג ההפעלה של המיקרוסקופ וסובב את לחצן כוונון האור לעוצמת אור מתאימה.
   3. סובב את הממיר של המיקרוסקופ האופטי ההפוך, בחר את עדשת האובייקט פי 10, סובב את ספירלות המיקוד הגסות והעדינות בתורן כדי להתאים את אורך המוקד. התבונן במצב המיקוד וחפש זרע אפידידימלי תחת המיקרוסקופ.
   4. המשך לסובב את הממיר של המיקרוסקופ ההפוך לעדשת האובייקט פי 40, סובב את ספירלת המיקוד העדינה כדי להתאים את אורך המוקד, והתבונן בשדה הזרע האפידידימלי לפי שדה. העריכו את מספר ואיכות הזרעונים האפידידימליים. ניתן לראות כי הזרעונים האפידידימליים הרגילים התבגרו והשיגו את היכולת לנוע.
2. טיפול בזרעונים אפידידימליים
   1. בהתבוננות במספיק זרעונים אפידידימליים פעילים, העבירו את הנוזל בצלחת התרבית לצינור צנטריפוגה של 15 מ"ל דרך פיפטה סטרילית של פסטר.
   2. הנח את צינור הצנטריפוגה הנ"ל על מגש האיזון והשתמש בצינור צנטריפוגה מאותו מפרט המכיל מים סטריליים עד ליישור.
   3. פתח את דלת הצנטריפוגה, הנח את צינורות הצנטריפוגה בחריץ הכרטיס בצורה סימטרית ולאחר מכן סגור את דלת הצנטריפוגה. הגדר את הכוח הצנטריפוגלי ל-500 x g ואת זמן הצנטריפוגה ל-5 דקות דרך לוח הבקרה. לחץ על הכפתור START בלוח הבקרה כדי להתחיל את תהליך הצנטריפוגה.
   4. לאחר השלמת תהליך הצנטריפוגה, פתח את דלת הצנטריפוגה והסר את צינור הצנטריפוגה המכיל את הנוזל האפידידימלי. הברג את המכסה, שאב בעדינות את הסופרנטנט בעזרת פיפטה פסטר סטרילית, והשליך את הסופרנטנט המצויר.
   5. באמצעות פיפטה סטרילית של פסטר, העבירו כ-2 מ"ל של תמיסת תרבית G-IVF-PLUS לצינור הצנטריפוגה. לאחר מכן פיפטה בעדינות את התמיסה בצינור הצנטריפוגה כדי להשעות מחדש ביסודיות.
   6. חזור על תהליכי האיזון, הצנטריפוגה והוצאת שכבת הנוזל העליונה.
   7. בהתאם לצרכים של הזרקת זרע תוך ציטופלזמית (ICSI), העבירו כ-0.5 מ"ל של תמיסת תרבית G-IVF-PLUS לצינור הצנטריפוגה באמצעות פיפטה פסטר סטרילית, ונשפו בעדינות את הזרע האפידידימלי בתחתית צינור הצנטריפוגה כדי לגרום לו להיות תלוי היטב.
   8. השתמש בזרע האפידידימלי המושעה ביסודיות ישירות לתהליך ICSI.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
צנטריפוגה	Origio MAXI	G123511110440	סל"ד מקסימלי: 4000; מקסימום RCF: 2826 x g
צינור צנטריפוגה	Falcon	352095	15 mL
מעמד מבחנה משולב	Shenzhen Zhicheng Long Technology Co., LTD	None
Culture dish	Falcon	353001	35 מ"מ x 10 מ"מ
תמיסת חיטוי	Shanghai Likang Disinfection high-tech Co., LTD	20230801S	60 mL
G-IVF PLUS	Vitrolife Sweden AB	511574	culture solution for epididymal fluid
G-MOPS PLUS	Vitrolife Sweden AB	511712	פתרון תרבות לפעולת פנצ'ר
High Security Embryo Pasteur Pipettes	Darwin	D2208003	230 מ"מ, Fire Polished
טבלת מכשירים<	DZ202012010
inverted optical microscope<		IX71
הזרקת לידוקאין הידרוכלוריד		H31021072	5 mL: 0.1 g
רפואי balance	Shanghai Guangzheng Medical Instrument Co., LTD<	JYT-2
מסכות כירורגיות רפואיות	גואנגג'ואו סיטי פאניו מחוז פאניו Haozheng מפעל חומרי בריאות	161220328	17.5×9.5 ס"מ (גודל נפרש 17.5×17 ס"מ)
שולחן הפעלה מונע מנוע	שאנדונג מינגטאי ציוד רפואי ושות', בע"	YZB0089-2011	שולחן פעולה
חבישת פצעים דביקה עצמית	Guangzhou Ya Tian Biological Technology Co., LTD	20142140348	6 ס"מ x 7 ס"מ (3 ס"מ x 4 ס"מ)<
מזרקים היפודרמיים סטריליים לשימוש חד פעמי	Shandong Weigao Group Medical polymer Products Co., LTD	20230921	5 מ"ל, מצויד ב-0.7 מ"מ (0.7 x 32TWLB)
כפפה כירורגית לטקס סטרילית ללא אבקה	בייג'ינג Ruijing לטקס מוצרים ושות', בע"מ	2023030322	71/2, 61/2
חבילת מכשירים כירורגיים	מחלקת האספקה של בית החולים השלישי המסונף לאוניברסיטת סון יאט-סן	10228376	autoclave sterilization
Surgical light	Shanghai Jishun Medical Device Manufacturing Co., LTD	JSL2009-160D
Vertical flow clean table	Suzhou Wanda Purification Technology Co., LTD	DS-CZ-1311006	SH-CJ-2FD-1500

treatmenttd style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>OLYMPUS td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>201609-4854מtr style='גובה:20px;'>