אספקה תוך ורידית של חוסמי קולטנים להפחתת בצקת מוחית במודל עכבר

תקציר

מקור: Zeynalov, E. et al., עירוי IV רציף הוא מסלול הטיפול המועדף עבור חוסם קולטן ארגינין-וזופרסין Conivaptan בעכברים לחקר בצקת מוחית מעוררת שבץ. J. Vis. Exp. (2016)

סרטון זה מדגים את ההעברה התוך-ורידית של אנטגוניסט לקולטן ארגינין-וזופרסין (AVP) במודל עכבר. חסימת עורק המוח האמצעי החולפת גורמת לבצקת מוחית. אנטגוניסט לקולטן AVP ניתן דרך קטטר בווריד הצוואר השמאלי, ומקל על בצקת.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. In Vivo Stroke Induction

1. ציפוי מראש של החוט בשרף דנטלי לפני הניתוח.
   1. חותכים חתיכת נימה באורך 12 מ"מ מתפר ניילון 7-0. מערבבים 2 חלקים מהשרף עם חלק אחד של המקשה, ולאחר מכן טובלים מיד את קצה החוט בתערובת כדי לכסות כ -1/3 מכל האורך. הסר אותו במהירות וודא שהוא מכוסה בשכבה חלקה של שרף דנטלי.
   2. יבש את החוט באוויר למשך שעתיים לפני השימוש.
2. הכנס את העכבר לתא אינדוקציה להרדמה (נפח 2 ליטר), והגדר את הזרימה של 1.5% איזופלורן באוויר החדר המועשר בחמצן ב-25% ב-2 ליטר לדקה הנכנס לתא.
3. אפשר לעכבר להישאר בתא האינדוקציה עד להרדמה מלאה, כפי שנקבע על ידי חוסר תגובה לצביטה בזנב.
4. הנח את העכבר על שולחן הניתוחים עם כרית מחוממת, והגדר את ריכוז האיזופלורן ל-1% לשמירה על הרדמה המועברת באופן ספונטני דרך חרוט האף.
5. גזזו את השיער בחלק הקדמי והאחורי של הצוואר, ורססו את הצוואר באלכוהול משפשף. יש למרוח משחת עיניים וטרינרית על שתי העיניים.
6. כדי לנטר באופן רציף את טמפרטורת הגוף, השתמש בבדיקת טמפרטורת פי הטבעת המחוברת לתצוגה דיגיטלית במהלך הניתוח.
7. הניחו את העכבר במצב שכיבה, מרחו תמיסת קרצוף פובידון-יוד 10% לחיטוי, כסו בווילון סטרילי ואז בצעו חתך בקו האמצע לאורך הצוואר בעזרת להב אזמל כירורגי בגודל 10.
8. קשר זמנית את עורק הצוואר המשותף השמאלי (CCA) עם תפר משי 6.0.
9. הנח עניבה נוספת על עורק הצוואר החיצוני השמאלי (ECA).
10. הנח קליפ מיקרו-וסקולרי על עורק הצוואר הפנימי (ICA).
11. חותכים חור קטן בעורק הצוואר החיצוני בעזרת מספריים מיקרו-וסקולריים. הכנס חוט העשוי מתפר ניילון 7-0 מצופה שרף דנטלי לתוך הפתח ב-ECA, וקדם אותו צפלית, תוך הסרת הקליפ, עד שתורגש התנגדות (כ-5-7 מ"מ מנקודת ההסתעפות של ה-CCA).
12. הנח עניבה זמנית על עורק הצוואר הפנימי כדי לאבטח את החוט במקומו. עיין בתרשים, איור 1A. סוגרים את העור בתפר משי, ומסתננים לפצע בקדמת הצוואר עם 0.2 מ"ל של 0.5% בופיבקאין, כמו בשלב 2.6.
13. אפשר לעכבר להתעורר מההרדמה ולחזור להכרה בתא התאוששות למשך 60 דקות. אין להשאיר את בעל החיים ללא השגחה עד שהוא חזר להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבה על עצם החזה.
14. בדוק את העכבר לניקוד גירעון נוירולוגי (NDS) כדלקמן: 0 = תפקוד מוטורי תקין, 1 = כיפוף פלג גוף עליון ושל הגפה הקדמית הנגדית בהרמת זנב, 2 = סיבוב לצד הנגדי אך יציבה תקינה במנוחה, 3 = הישענות לצד הנגדי במנוחה, 4 = ללא פעילות מוטורית ספונטנית.
    1. לבדיקת NDS, הרם את העכבר בזנב והנח אותו על משטח ישר לתצפית (2-3 דקות). לחלופין, התבונן בעכברים בתא ההתאוששות. אל תכלול עכברים המציגים NDS נמוך מ-2 מהניסוי עקב חסימה לא מספקת של עורק הצוואר האמצעי (MCA).
       הערה: ניתן להשתמש בטכניקת זרימת דופלר בלייזר כדי לאשר חסימת MCA.
15. יש להרדים מחדש את בעל החיים לאחר 60 דקות של החלמה בתא האינדוקציה כמתואר לעיל, לעקר מחדש את חתך העור הקודם עם תמיסת קרצוף פובידון-יוד 10%, ולפתוח מחדש את הפצע הניתוחי בקדמת הצוואר על ידי חיתוך והסרה של תפר המשי.
16. כדי להסיר את החוט מה-ECA, בצע את השלבים הבאים:
    1. הנח קליפ מיקרו-וסקולרי על ה-ICA. שחרר את התפר על ה-ICA ומשוך את החוט החוצה תוך החזקת הקליפ פתוח.
    2. סגור את הקליפ והנח עניבה על ה-ECA בסמוך לחיתוך.
    3. הסר את הקליפ ואת הקשירה מה-CCA כדי להחזיר את זרימת הדם למוח. עיין בתרשים, איור 1B.

2. התקנת קטטר תוך ורידי (IV) לווריד הצוואר לטיפול רציף של 48 שעות

הערה: המשך להתקנת הקטטר מיד לאחר שלב 1.16.3 מבלי להעיר את העכבר.

1. השתמש בשני גדלים שונים של צינורות גמישים: הכנס את הצינור הפנימי (קוטר חיצוני של 0.94 מ"מ; כדי להכיל את התרופה המוחדרת) לתוך הצינור החיצוני (קוטר חיצוני של 3.18 מ"מ; להגנה על הצינור הפנימי).
2. הניחו את העכבר במצב שכיבה, מרחו תמיסת קרצוף פובידון-יוד 10% לחיטוי, ובצעו חתך של 1 ס"מ בחלק האחורי של הצוואר בעזרת להב אזמל כירורגי בגודל 10. סובב את העכבר למצב שכיבה, עקר מחדש את החלק הקדמי של הצוואר עם תמיסת קרצוף פובידון-יוד 10%, ופתח מחדש את פצע הניתוח בקדמת הצוואר. מנהרת הצינור מתחת לעור מהחתך שנעשה בגב לקדמת הצוואר, והוציא אותו מהפצע הפתוח 1 ס"מ.
3. הסר את רקמת השומן התת עורית מהצד השמאלי של קדמת הצוואר כ -1 ס"מ לרוחב מקו האמצע. אתר את וריד הצוואר השמאלי, הניח שני קשרים לאורך הווריד במרחק של 5 מ"מ זה מזה, ומתח מעט את הווריד. צור חור קטן בווריד הצוואר בין שני הקשרים בעזרת מספריים מיקרו-וסקולריים; הכנס את קצה הצינור הפנימי בעומק 5 מ"מ בזנב (לכיוון הלב).
4. אבטח את הצינור עם שני הקשרים לווריד הצוואר. סגור את העור בקדמת הצוואר עם תפר משי 3-0. עיין בתרשים, איור 1C.
5. הצמידו את הצינורית לעור בחלק האחורי של הצוואר בעזרת תפר, וחברו את הצינור למשאבת מיקרואינפוזיה לווריד באמצעות סיבוב. המסתובב מאפשר תנועה חופשית של עכברים בתוך הכלוב עם גישה מלאה למזון ולמים.
6. הסתננו לחתכי העור בחלק הקדמי והאחורי של הצוואר עם 0.2 מ"ל של 0.5% בופיבקאין כדי למנוע כאבים לאחר הניתוח.
   הערה: בהתאם לפרוטוקולים ספציפיים למוסד לבעלי חיים, ניתן לטפל בבעלי חיים באופיואידים, תרופות נוגדות דלקת לא סטרואידיות (NSAIDs), או אנטיביוטיקה לפני ואחרי הניתוח. עם זאת, הטיפולים שהוזכרו עשויים לשנות את התוצאות של תוצאת שבץ איסכמי.
7. אפשרו לחיה להתעורר בתא ההתאוששות, ואז שיכנו את החיה בכלוב נפרד עד לסיום הניסוי. אין להשאיר את בעל החיים ללא השגחה עד שהוא חזר להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבה על עצם החזה.
8. הגדר את קצב העירוי לטיפול רציף של 48 שעות בעירוי של קוניבפטן (0.14 מ"ג/מ"ל ב-5% דקסטרוז) או ברכב על 1.5 מ"ל/ק"ג/שעה, והתחל בעירוי.
   הערה: הכמות הכוללת של קוניבפטן בעירוי IV צריכה להיות כ-0.2 מ"ג/עכבר/יום בנפח כולל של 1.44 מ"ל.

תוצאות

איור 1: תרשים של מודל השבץ הניסיוני, התקנת קטטר IV ונפח האוטם המייצג ב-48 שעות לאחר השבץ. מיקום החוט (מוצג בכחול) מצופה מראש בשרף (ירוק) בעורק הצוואר הפנימי השמאלי (ICA) במהלך החסימה (A) וזמן הרפרפוזיה (B...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
כרית מחוממת	K&H Manufacturing Inc	1060
מוניטור טמפרטורה עם בדיקה רקטלית	Physitemp	7029
סליל תפר משי, 6-0	Surgical Specialties Corporation	SP114
תפר משי על מחט, 3-0	Ethicon	1684G
, 7-0	Ethicon	1696G
שרף דנטלי פוליסילוקסן עם מקשה	Heraeus Kulzer	65817930
משאבת Microinfusion IV קנט	Scietific	GT0897
מסתובב 22GA	Instech	375/22PS
צינורות מעבדה, 0.94 x 0.51 מ"מ	דאו קורנינג	508-002
צינורות מעבדה, 3.18 x 1.98 מ"מ	דאו קורנינג	508-009

תפר ניילון