טיפול תוך מוחי-חדרי עם Resiniferatoxin להפחתת רגישות TRPV1 במוח העכבר

תקציר

מקור: Fukushima, A., et al. טיפול תוך מוחי-חדרי עם Resiniferatoxin ובדיקות כאב בעכברים. J. Vis. Exp. (2020)

סרטון זה מדגים את ההליך להזרקה תוך מוחית של resiniferatoxin בעכברים כדי להפחית את הרגישות לקולטני TRPV1 במוח.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. הזרקה תוך מוחית של

1. עכברי הרדמה RTX עם מלח נתרן פנטוברביטל (60 מ"ג/ק"ג, תוך צפק), ובדוק אם יש אובדן רפלקס היישור.
2. לטיפול תוך מוחי-חדרי (i.c.v), יש להזריק 5 מיקרוליטר של resiniferatoxin (RTX) (20 מיקרוגרם/מ"ל) לחדר הצדדי הימני. עבור קבוצת הביקורת, הזרקו את הרכב (10% אתנול, 10% פוליאוקסיאתילן (20) סורביטן מונואולאט ו-80% נוזל מוחי מלאכותי (ACSF)) באותו אופן.
   1. העבירו מחט חד פעמית של 27 גרם דרך צינור מתכת (0.8 מ"מ ID) כדי לחשוף את קצה המחט בגודל 3.0-3.5 מ"מ (איור 1A).
   2. חטאו את ראש העכבר עם 70% אלכוהול והחזיקו את עצמות הקשקש של העכבר בחוזקה עם האצבעות (איור 1B). הערה: שימו לב למיקומי בליטות הקשקש, מכיוון שבליטות אלו ישמשו ציוני דרך להזרקה.
   3. הזיזו את המחט לרוחב על הקרקפת ומצאו את התפר הסגיטלי כשקצה המחט מחובר לתפר.
   4. הזיזו את הקצה כ-1 מ"מ ימינה, ואז הזיזו את הקצה בצורה יציבה, ומצאו את התפר העטרתי. (איור 1B).
   5. הכנס את המחט לאט ואנכית, הזריק את תמיסת ה-RTX תוך כ-10 שניות והחזק אותה למשך כ-10 שניות.
   6. משוך את המחט לאט והחזיר את העכבר לכלוב הביתי שלו. הדימום הוא בדרך כלל מינימלי או נעדר. אם מתרחש דימום גדול, יש לשקול שימוש בעכבר אחר.

תוצאות

איור 1: תצוגות צילום וסכמטיות של הזרקה תוך מוחית (i.c.v). (A) מחט המשמשת להזרקת i.c.v. (B) סכימה של גולגולת העכבר ותנועת קצה המחט. עצמות קשקש מוצגות בכחול.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Resiniferatoxin	LKT Laboratories	R1774	המשמש לטיפולים מקדימים של s.c./i.c.v ובדיקת RTX
מלח נתרן פנטוברביטל	טוקיו תעשיה כימית	P0776	המשמש להרדמה
אתנול (99.5%)	וואקו Pure Chemical Industries	057-00456	משמש להמסת RTX
פוליאוקסיאתילן(20) סורביטן מונואולאט	Wako Pure Chemical Industries	161-21621	המשמש להמסת RTX
25 מ"ל מיקרו-מזרק	המילטון	1702LT	המשמש להזרקת i.c.v.
מחט חד פעמית 26 מד	TERUMO	NN-2613S	המשמשת להזרקת i.c.v.