$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.
- חסימת עורק המוח האמצעי (MCAO):
- מקם וקבע את העכבר המורדם (עם בדיקת זרימה דופלר לייזר (LDF) המחוברת לגולגולתו) במצב שכיבה ושמור על טמפרטורת גופו באמצעות מנורת חום לאורך כל הניתוח. חיטוי הצוואר עם 70% אלכוהול אתילי.
- בצע חתך עור פרמדיאני בצוואר באמצעות אזמל; נתח את הרקמות הרכות בעזרת מלקחיים כדי לחשוף כלי דם. הוסיפו טיפה אחת של מי מלח לרקמות החשופות כדי לשמור על לחותן.
- נתח את עורק הצוואר המשותף מהרקמה שמסביב ועצב הנרתיק באמצעות מלקחיים עיניים. היזהר לא לפגוע בעצב הנרתיק. יש לחטא שוב את עור הצוואר ביודופור לאחר חשיפת עורק הצוואר המשותף.
- הנח מהדק מיקרו-כלי בקצה הדיסטלי של עורק הצוואר המשותף ולאחר מכן קשר קשר מת עם תפרי משי 6-0 בקצה הפרוקסימלי. הנח את המהדק קרוב ככל האפשר לפעולות הבאות. ודא שאורך הכלי בין המהדק לקשר המת ארוך ככל האפשר לפעולות הבאות.
- צור תפר זמני קרוב למהדק על ידי קשירת קשר רופף. ודא שיש מספיק מקום בין שני קשרים להכנסת מונופילמנט.
- בצע חתך אורכי קטן בין שני הקשרים בעזרת מספריים מיקרו-עיניים. ודא שהחתך קרוב ככל האפשר לקשר המת לפעולות הבאות. היזהר לא לחתוך את הכלי.
- הכנס מונופילמנט קהה בקצה 12 מ"מ דרך החתך כדי להיכנס ללומן העורק ולקדם אותו כמה מ"מ. הדק את הקשר הרופף סביב קצה המונופילמנט ולאחר מכן הסר את המהדק.
- קדם את החוט לעורק הצוואר הפנימי (10 מ"מ כדי לחסום את עורק המוח האמצעי) בעזרת מלקחיים עיניים עד שתוכנת ה-LDF תראה ירידה חדה (ירידה של >80% מזרימת הדם הבסיסית) בזרימת הדם. רשום את שעת ההתחלה של החסימה.
- חסום את עורק המוח האמצעי למשך שעה. חתכו את בדיקת ה-LDF והכניסו את העכברים לאינקובטור של 30 מעלות צלזיוס למשך החסימה.
- Reperfusion and Acidic Postconditioning (APC):
- להרדים מחדש את בעלי החיים עם איזופלורן כמתואר לעיל, 55 דקות לאחר שעת תחילת החסימה. מניחים ומקבעים עכברים במצב שכיבה. פתח את חתך הצוואר וחשוף מחדש את עורק הצוואר המשותף.
- משוך בעדינות את החוט בעזרת מלקחיים עיניים לאחר תקופת החסימה כדי להשיג רפרפוזיה ולהפוך את התפר הזמני לקבוע, על ידי הידוק הקשר.
- לטיפול בחמצת, החלף את הגז הנשאף על ידי חרוט האף לתערובת הגזים המכילה 20% CO2, 20% O2 ו-60% N2 למשך 5 דקות ב-5, 50 או 100 דקות לאחר הזלוף. סגור את החתך בתפר כירורגי קטוע.
- הכניסו עכברים לכלוב חום של 30 מעלות צלזיוס עד שהעכברים יחזרו להכרה ואז החזירו את העכברים לכלובים נקיים ונפרדים. ספקו לעכברים צלחת פטרי עם מים ומזון לח. עקוב מקרוב אחר העכברים לאחר הניתוח לאיתור כאב מוגזם ומוות.