הסתגלות עצבית להתניה מוקדמת היפוקסית חוזרת בעכברים

תקציר

מקור: Poinsatte, K., et al., כימות הגנה נוירו-וסקולרית בעקבות התניה מוקדמת היפוקסית חוזרת וחסימת עורק מוח אמצעי חולף בעכברים. J. Vis. Exp. (2015)

סרטון זה מדגים את השיטה של התניה מוקדמת היפוקסית חוזרת (RHP) על ידי חשיפת עכבר למחזורי היפוקסיה מבוקרים לפני גרימת שבץ איסכמי. הניסוי מעריך את השפעותיו על יציבות מחסום הדם-מוח, הסתגלות עצבית ודלקת.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. מיזוג מוקדם היפוקסי חוזר ונשנה

1. תכנון מותאם אישית של ארבעה מדי זרימה על ווסתי גז והצמדתם לתאי אינדוקציה סטנדרטיים של 15 ליטר עם צינורות פוליוויניל כלוריד (PVC) כדי לאפשר לגז דחוס ממיכלי החמצן (O₂) לזרום לתאים דרך יציאת כניסה.
2. חלקו את העכברים לשתי קבוצות: קבוצת ההתניה ההיפוקסית החוזרת (RHP), המקבלת חשיפה ל-8% ו-11% O₂, וקבוצת הביקורת, המקבלת חשיפה ל-21% O₂ (אוויר החדר) במקביל.
3. הסר את מכסה המסנן העליון של כל כלוב והנח את הכלוב, עם בקבוקי מזון ומים שלמים, בתאים המחוברים למיכלי ה-O₂ שלהם. סגור ואבטח את מכסה החדר.
   1. פתח את שסתום הגז הראשי למיכלים והגדר את הזרימה הראשונית עבור כל תא אינדוקציה ל-2 ליטר לדקה (LPM) למשך 5 הדקות הראשונות של החשיפה. הפחת את קצב הזרימה ל-1 LPM למשך שארית החשיפה.
   2. בתום החשיפה יש להפחית את הזרימה ל-0 LPM ולסגור את שסתומי הגז של המיכלים.
   3. פתח את מכסי התא והחזר את המכסה העליון של המסנן בכל כלוב. הנח את הכלובים בבית סטנדרטי עד לחשיפה ההיפוקסית הבאה.
4. רססו כל תא אינדוקציה עם NPD (Steris) או חומר חיטוי/מפיג ריחות שווה ערך לאחר כל שימוש.
5. חשוף גם עכברי 21% וגם עכברי RHP באותה שעה ביום במהלך שבועיים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מדי זרימה, רגולטורים	VetEquip, Inc	הזמנה מיוחדת	ארבעה מדי זרימה מחוברים לצינורות PVC גמישים בגודל 6.0 מ"מ המתחברים ליציאת הכניסה בכל תא אינדוקציה עם מחבר נקבה מפלסטיק. מדי זרימה אלה מוברגים למוט מתכת בגודל 6.5 אינץ' x 1 אינץ' x 1 אינץ'. מוט מתכת זה מוברג למד לחץ MI-246-P עם שקע DISS. ניתן לחבר את מד הלחץ וציוד מד הזרימה הזה לכל בלון גז חדש באמצעות מפתח ברגים.
21% O₂ מיכל	AirGas	OX USP200
11% O₂ מיכל	AirGas	Specialty הזמנה
8% O₂ מיכל	AirGas	Specialty הזמנת
15 ליטר תאי אינדוקציה	VetEquip	941454