מאמר שיטה

טכניקת ספקטרוסקופיה אינפרא אדום טרנספורמציה פורייה לחקר הרכבה עצמית של פפטידים

13 באוגוסט 2025

במאמר זה

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Neves, R., et al. סינתזה ואפיון של פפטידים בהרכבה עצמית שונה של 1,2-dithiolane. J. Vis. Exp. (2018)

סרטון זה מדגים את ההרכבה העצמית של פפטידי עמילואיד למבנה על-מולקולרי עשיר ביריעות בטא באמצעות ספקטרוסקופיה אינפרא אדום טרנספורמציה פורייה. קרן אינפרא אדום מועברת דרך גביש בעל מקדם שבירה גבוה, וספיגת אנרגיה על פני ממשק הגביש והדגימה נרשמת. המבנים המשניים של חלבוני הדגימה מזוהים על ידי ניתוח שיאי הספיגה האופייניים להם באזורים ספציפיים של ספקטרום האינפרא אדום, מה שמסייע בזיהוי היווצרות המכלול העל-מולקולרי.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. אפיון מבנים סופרמולקולריים להרכבה עצמית

  1. היווצרות סיבי עמילואיד
    1. להכנת תמיסה להרכבה עצמית, שקלו 1 מ"ג מאבקת הפפטיד באמצעות איזון אנליטי. ממיסים לתערובת (pH 7.5) של 20% אצטוניטריל ו-10 מ"מ (4-(2-הידרוקסיאתיל)-1-פיפרזינאתיל-חומצה סולפונית (HEPES) בצינור מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מ"ל, לריכוז סופי של תערובת הרכבת פפטיד של 1 מ"ג/מ"ל. מערבל את תמיסת ההרכבה והשאיר אותה להרכבה בטמפרטורת החדר.
  2. אפיון ספקטרוסקופי של סיבי עמילואיד
    1. עקוב אחר תהליך הרכבת הפפטידים באמצעות ספקטרוסקופיה אינפרא אדום פורייה (FTIR) כל כמה ימים. שיא רחב שבמרכזו 1670 ס"מ-1 הוא חתימת ה-IR הנובעת מפפטידים לא מורכבים בדגימה. לדגימות הרכבת הפפטידים לוקח בדרך כלל שבוע עד שבועיים עד שהשיא הרחב הלא מורכב נעלם ומגיע להתבגרות.
      1. יבש כמות של 8-10 מיקרוליטר מתמיסת ההרכבה כסרט דק על גביש היהלום ATR. עקוב אחר היעלמותו של פסגת מים גדולה ורחבה מ-1640 עד 1630 ס"מ-1 עם היווצרות הסרט היבש.
      2. רכוש ספקטרום IR מ-1500-1800 ס"מ-1 בממוצע 50 סריקות ברזולוציה של 2 ס"מ-1. רכוש והחסיר את סריקות הרקע לפני כל סריקת דגימה. חתימת ה-IR עבור הרכבה של β גיליונות היא שיא חד בין 1625 ל-1635 ס"מ-1 (איור 1A).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ספקטרום FTIR 1627/1676 ס
איור 1. אפיון סופרמולקולרי של פפטיד שונה 1,2-dithiolane. (א) FT-IR של 1 מ"ג/מ"ל 1,2-דיתיולן-KLVFFAQ-NH2 סיבים המורכבים ב-10 מ"מ HEPES, pH 7.5 ב-20% CH3CN. השיא ב-1627 ס"מ-1 תואם את הפפטידים המורכבים בקונפורמציה של β יריעות. (B) CD של 1 מ"ג/מ"ל 1,2-דיתיולן-KLVFFAQ-NH2...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אצטוניטרילפישר סיינטיפיקA998-4דליק; מגרה את העיניים; השתמש בציוד מגן אישי; השתמש רק מתחת למכסה אדים; הרחק מלהבה פתוחה או משטח חם; אם במגע יש לשטוף במים למשך 15 דקות לפחות ולקבל טיפול רפואי
4-(2-הידרוקסיאתיל)פיפרזין-1-חומצה אתנסולפוניתAcros OrganicsAC172571000אין לשאוף; יש להשתמש בחוץ או באזור מאוורר היטב
ספקטרומטר אינפרא אדום פורייה-טרנספורמציהאלפא טנזור, ברוקר

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

ATR

מאמרים קשורים