$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.
1. מערך
- ניסוי הכנת בעלי חיים
- אפשר לחולדות Sprague-Dawley זכרות שבוע אחד להסתגל לסביבה החדשה שלהן לפני תחילת הניסוי.
הערה: למרות שנעשה שימוש בחולדות בנות 8 שבועות במחקר הנוכחי, ניתן לבחור מוח מתפתח או בוגר על פי השערות המחקר.
- הרדמה באינהלציה לאינדוקציה
- השרה ושמירה על הרדמה עם 5% ו-2% של איזופלורן מומס ב-40%/60% ו-25%/75% חמצן/חנקן דרך תא וחרוט אף, בהתאמה. התאם את עומק ההרדמה לרמה של ביטול רפלקס נסיגת הדוושה לצביטה בבוהן כדי לאשר הרדמה נכונה.
הערה: שימוש בבעלי חיים ערים יכול להיות בחירה טובה יותר במונחים תרגומיים, אך ישנם קשיים בריסון במהלך rTMS, והם נוטים ללחץ מוגזם. - עקוב אחר טמפרטורת הגוף עם בדיקה רקטלית ושמור עליה על 37 מעלות צלזיוס באמצעות שמיכה הומותרמית. עקוב אחר עומק ההרדמה באמצעות רפלקס נסיגת דוושה, טמפרטורה, קצב נשימה וקצב לב.
- עבור להרדמה תוך ורידית לצורך תחזוקה
- הכן את הזנב בעזרת ספוגית אלכוהול. צנתר וריד זנב לרוחב עם קטטר ורידי בגודל 24 למעבר להרדמה תוך ורידית (IV) (איור 1A). העמיסו פרופופול תוך ורידי (1 מ"ג/[ק"ג·דקה] במשך 10 דקות, באמצעות תחליב של 10 מ"ג/מ"ל) לבעלי החיים. יש להפסיק את השימוש באיזופלורן 5 דקות לאחר תחילת העמסת הפרופופול.
- שמור על טשטוש פרופופול בקצב עירוי של 500 - 700 מיקרוגרם/(ק"ג·דקה) לאורך כל הניסוי, כמו במחקר קודם. תוסף חמצן ב-0.8 ליטר לדקה דרך חרוט אף.
הערה: הרדמה עם פרופופול נועדה להפחית את הדיכוי הפוטנציאלי של ריגוש קליפת המוח על ידי חומר השאיפה. אולם הרדמה אינה חובה בניסויי rTMS, וניתן להשתמש גם בחיות ערות. יש להחליט על שיטות הרדמה בהתחשב בהשערות המחקר. - יש להשתמש במשחה וטרינרית על העיניים כדי למנוע יובש בזמן ההרדמה.
- הפעל גירוי מגנטי (ראה סעיף 2) 10 דקות לאחר מעבר מלא להרדמה IV.
- תנאי התאוששות
- עקוב אחר סימנים חיוניים בשלב ההחלמה. אין להשאיר את בעל החיים ללא השגחה עד שהוא חזר להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבה על החזה. אם בעל חיים עבר ניתוח, אל תחזיר אותו לחברת בעלי חיים אחרים עד להחלמה מלאה.
הערה: אם מבוצע ניתוח למודל מחלה, יש צורך בטיפול בכאב לאחר הניתוח. עם זאת, אין צורך בניהול כאב עבור ניסוי rTMS זה.
2. ממריץ
גירוי מגנטי טרנס-גולגולתי חוזר ונשנה
- וסליל
- הפעל גירוי באמצעות ממריץ חוזר המספק גירויים דו-פאזיים באמצעות סליל 25 מ"מ דמות 8. אתר את מרכז הסליל 0.5 ס"מ לרוחב הקודקוד בקו הדו-אוזני וזווית הסליל 45° לקרקע.
הערה: עוצמת השדה המגנטי המקסימלית של הסליל היא 4.0 T. הסליל המגנטי מותקן היטב על מחזיק מובנה.
- סף מנוע
- קבע את סף המנוע (MT) בנקודה החמה, כאשר מרכז הסליל ממוקם 0.5 ס"מ לרוחב הקודקוד בקו הביאוריקולרי ועם המשטח שטוח על הקלבריה. זוהי אותה מתודולוגיה ששימשה במחקר קודם.
הערה: הגדר MT כעוצמת הגירוי המינימלית המעוררת 5 התכווצויות מוחשיות או יותר על כף היד הקדמית הנגדית על ידי 10 גירויים רצופים. בדוק אם הגירוי גורם בעיקר להתכווצות שרירים נגדית כדי להבטיח גירוי חד צדדי.
- יישום rTMS
- החל rTMS 10 דקות לאחר ייצוב ההרדמה העמוקה. מקם את מרכז הסליל באתר המטרה rTMS, שנבחר מקליפת המוח בהתאם לשאלות המחקר. לאחר מכן, הטו את הסליל כדי להבטיח מגע ישיר בין מרכז הסליל לבין פני הגולגולת בנקודת הגירוי.
הערה: לדוגמה, כוונו את הסליל לזווית של 45° לקרקע כדי למזער את ההשפעה הישירה הפוטנציאלית של rTMS על קליפת המוח הנגדית (איור 1B ו-1C). - הכניסו את החיות לסשן של 20 דקות rTMS של ההמיספרה החד-צדדית. באמצעות קונסולת התוכנה, ספק rTMS בתדר נמוך (1 הרץ), בתדר גבוה (20 הרץ) או פרוטוקול גירוי דמה, והגדר את עוצמת הגירוי ל-100 - 110% מה-MT.
- בצע גירוי של 1 הרץ ללא מנוחה. באמצעות קונסולת התוכנה, הזן "1,200" צילומים למשך "20" דקות. לגירוי של 20 הרץ, בצע 2 שניות של גירוי ואחריו 28 שניות של מנוחה. באמצעות קונסולת התוכנה, הזן "1,600" צילומים למשך "20" דקות.
- עבור גירוי דמה, הטו את הסליל בניצב (סיבוב של 90°) לקלווריה והניחו את קצה הסליל במרחק של 2 ס"מ משטח הראש (איור 1D). תקן את מחזיק הסליל בחוזקה למנגנון הראשי; אין צורך להחזיק את הסליל ביד במהלך הניסוי.
הערה: כדי לפצות על השפעות אקוסטיות ואחרות שאינן ספציפיות, יש להשתמש בפרוטוקולי דמה מובהקים לפרוטוקולי גירוי מובחנים. לדוגמה, גירוי דמה של 1 הרץ יכול לשמש לניסויי rTMS של 1 הרץ.
- קירור הסליל
- השתמש במערכת קירור מים כדי לאפשר גירוי מגנטי חוזר ונשנה במשך יותר מ-20 דקות בתדרי גירוי של 1 ו-20 הרץ (איור 2). הפיצו מים קפואים המקיפים את כל אורך הסליל במהלך הניסוי כדי למנוע התחממות יתר, אם כי הטמפרטורה של הסליל או הממריץ אינה מנוטרת.
הערה: ניתן להשתמש גם בסלילי חולדות מקוררים זמינים מסחרית. - במידת האפשר, עקוב אחר טמפרטורת הסליל על ידי צפייה במד החימום של מכונת ה-rTMS.
הערה: לא היו השלכות שליליות הקשורות לגירוי rTMS. עם זאת, קיים סיכון פוטנציאלי לכוויות אם נעשה שימוש בתגי זיהוי אוזניים ממתכת ליד הסליל המגרה.
